Test de fermentation des glucides sur des bactéries pour déterminer leur capacité à fermenter des glucides

Test de fermentation des glucides sur bactéries afin de déterminer leur capacité à fermenter les glucides!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de fermenter les glucides, en particulier les sucres. Parmi elles, chaque bactérie ne peut fermenter que certains des sucres, alors qu'elle ne peut fermenter les autres.

Ainsi, les sucres qu’une bactérie peut fermenter et les sucres qu’elle ne peut pas sont caractéristiques de la bactérie.

Le test de fermentation des glucides est effectué pour vérifier séparément la capacité des bactéries à fermenter les sucres tels que le glucose, le saccharose, le lactose, le maltose et le xylose, ainsi que leurs dérivés alcooliques tels que l’aesculine, la salicine, l’adonitol, le dulcitol et le sorbitol. Si les bactéries peuvent fermenter un sucre ou un dérivé du sucre, un acide est produit, ce qui réduit le pH et fait passer la couleur du pourpre de bromocrésol de pourpre à jaune.

En outre, s’il s’agit d’une «bactérie aérogène», de l’acide et du gaz (CO2) sont produits, tandis que s’il s’agit d’une bactérie ananaérogène », seul l’acide est produit sans aucun gaz. La production de gaz est indiquée par son accumulation sous forme de bulle dans un tube de Durham inversé (un tube à essai miniature).

Dans le test de fermentation des glucides, la bactérie à tester est cultivée dans un milieu contenant un des sucres ou dérivés de sucres et du pourpre de bromocrésol. Un tube de Durham inversé y est maintenu immergé.

Si la bactérie «a la capacité de fermenter le sucre ou les dérivés du sucre, la couleur du bouillon passe du violet au jaune. Si l'accumulation de gaz est vue comme une bulle dans le tube de Durham, il s'agit d'une bactérie acrogène, alors que si aucune accumulation de gaz n'est observée, il s'agit d'une bactérie anaérogène.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, tubes Durham, fiole conique, tampons en coton, anneau d'inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à écoulement laminaire, pot à incubateur, incubateur, bouillon d'hydrate de carbone (bouillon contenant le sucre spécifique ou des dérivés du sucre comme le glucose, le saccharose, le lactose, le maltose, le maltose, le xylose), aesculine, salicine, adonitol, dulcitol, sorbitol, etc.), des colonies isolées ou des cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu bouillon glucidique (contenant le glucide requis et du pourpre de bromocrésol comme composants principaux) ou sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 100 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml. en secouant et en tourbillonnant (figure 7.8).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 6, 8 en utilisant du HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou en utilisant du NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon est réparti dans cinq tubes à essai (environ 10 ml chacun).

4. Un tube de Durham est inversé dans le bouillon de chaque tube à essai. Les tubes de Durham contiennent de l’air et flottent. Pendant la stérilisation, la vapeur chaude déplace cet air, ce qui les immerge dans le bouillon. Ainsi, il n’est pas nécessaire de retirer l’air des tubes de Durham en les remplissant du bouillon avant la stérilisation pour les maintenir immergés dans le bouillon.

5. Les éprouvettes sont en coton bouché, recouvertes de papier kraft et nouées avec du fil ou une bande de caoutchouc.

6. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave. Alternativement, on stérilise 90 ml du milieu de base (milieu sans hydrate de carbone) dans l'autoclave et, après refroidissement, on ajoute 10 ml de la solution d'hydrate de carbone (10%) stérilisée par filtration sur membrane. Ceci est particulièrement essentiel pour les glucides thermosensibles, qui subissent une dégradation lors de la stérilisation à la chaleur.

7. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

8. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

9. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C pendant 24 heures dans un incubateur.

Observations:

1. La couleur du bouillon se change en jaune et le gaz s'accumule dans le tube de Durham: Fermentatif pour l'hydrate de carbone et acrogène.

2. La couleur du bouillon change en jaune, mais aucun gaz ne s'accumule dans le tube de Durham: Fermentatif pour l'hydrate de carbone et anaérogène.

3. La couleur du bouillon ne change pas: non glucidique pour les glucides.