Test d'utilisation du citrate pour vérifier la capacité d'une bactérie à utiliser le citrate comme source de carbone

Essayez d’effectuer un test d’utilisation du citrate pour déterminer la capacité d’une bactérie à utiliser le citrate comme source unique de carbone.

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de se développer dans des milieux sans C et N. organiques.

Ils peuvent utiliser le citrate de sodium comme seule source de C et le dihydrogénophosphate d'ammonium (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) comme seule source de N. Ils utilisent NH ₄ H ₂ P0 ₄ pour obtenir l'azote avec production de NH ₃, ce qui augmente la pH entraînant un changement de couleur du bleu de bromothymol du vert (pH = 6, 9) au bleu (pH supérieur à 7, 6).

Dans le test d'utilisation du citrate, les bactéries à tester sont cultivées sur des géloses inclinées ne contenant pas de C ou de N organique, mais contenant plutôt du citrate de sodium, NH ₄ H ₂ P0 ₄ et du bleu de bromothymol. Si la bactérie est capable d’utiliser le citrate comme source unique de C, elle présente une croissance sur les pentes. Il utilise également NH ₄ H ₂ P0 ₄ comme seule source d’azote, ce qui modifie la couleur des pentes du vert au bleu.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, aiguille à inoculer, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal, incubateur, gélose au citrate de Simmons, colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu gélose au citrate de Simmons (contenant du citrate de sodium, NH ₄ H, P0 ₄ et du bleu de bromothymol comme ingrédients principaux) ou sa poudre prête à l'emploi requise pour 100 ml de milieu sont pesés et dissous dans 100 ml de solution distillée. de l'eau dans une fiole conique de 250 ml en agitant et en faisant tourbillonner (figure 7.6).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 6, 9 à l'aide de HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur.

3. Le ballon est chauffé pour dissoudre complètement la gélose dans le milieu.

4. Avant de se solidifier, le milieu à l'état fondu et chaud est réparti dans 5 tubes à essai (environ 20 ml chacun).

5. Les éprouvettes sont en coton bouché, recouvertes de papier kraft et nouées avec du fil ou une bande de caoutchouc.

6. Ils sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

7. Après la stérilisation, ils sont sortis de l'autoclave et maintenus dans une position inclinée pour refroidir et solidifier le milieu, de manière à obtenir une inclinaison de la gélose au citrate.

8. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans les pentes en coupant à l'aide d'un couteau dans le mégot et en laissant des stries sur la surface des pentes à l'aide d'une aiguille stérilisée à la flamme. L'aiguille est stérilisée après chaque inoculation.

9. Les pentes inoculées sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures dans un incubateur.