Test de la coagulase sur les bactéries pour déterminer leurs capacités à coaguler le sang (avec figure)

Test de la coagulase sur les bactéries pour déterminer leur capacité à coaguler le sang (avec figure)!

Principe:

Les souches pathogènes de la bactérie Staphylococcus contiennent l’enzyme coagulase, qui agit dans les tissus hôtes pour convertir le fibrinogène en fibrine.

Le réseau de fibrine formé entoure les cellules bactériennes ou les tissus infectés, protégeant ainsi la bactérie des mécanismes de résistance non spécifiques de l’hôte, tels que la phagocytose et l’activité antistaphylococcique du sérum normal.

Cette enzyme contribue également à la coagulation du sang chez l'hôte en étant un précurseur de la substance ressemblant à la thrombine, qui coagule ou coagule le sang. Le test de la coagulase est effectué pour distinguer le staphylocoque coagulase positif (pathogène ou virulent)) du coagulase négatif (non pathogène ou avirulent).

Dans le test à la coagulase, une suspension de l’espèce testée de Staphylococcus est mélangée à du plasma sanguin et le plasma inoculé est ensuite examiné périodiquement pour la formation de fibrine ou la coagulation.

La formation de caillots dans les quatre heures est interprétée comme un résultat positif indiquant une souche de Staphylococcus virulente (pathogène). L'absence de coagulation après 24 heures d'incubation est un résultat négatif, indiquant une souche virulente (non pathogène).

Matériaux nécessaires:

Animal de laboratoire (lapin ou cochon d'Inde), seringue, anticoagulant (citrate de sodium ou héparine), tubes de prélèvement de sang, centrifugeuse, tubes à essai, lame, anneau d'inoculation, bec bunsen, chambre à flux laminaire, jarre, colonies isolées ou cultures pures de bactéries du genre Staphylococcus.

Procédure:

1. La seringue et les tubes de prélèvement de sang sont lavés avec une solution de citrate de sodium ou d'héparine, de manière à empêcher la coagulation du sang immédiatement après le prélèvement (Figure 7.24).

2. À l'aide de la seringue, le sang est prélevé sur des animaux de laboratoire comme le lapin ou le cobaye et est introduit dans les tubes de prélèvement.

3. Le sang est centrifugé à 3000 tr / min pendant 15 minutes dans une centrifugeuse.

4. Le surnageant (plasma) est recueilli dans un autre tube à essai citraté et le résidu (cellules sanguines) est jeté.

(a) méthode de la diapositive:

1. Deux gouttes d'une suspension de la bactérie à tester appartenant au genre Staphylococcus sont placées sur deux moitiés également divisées d'une lame à l'aide d'une boucle d'inoculation. Une goutte est utilisée comme "contrôle" pour voir si la bactérie elle-même est en touffes et l'autre goutte est utilisée comme "test".

2. A la "goutte d'essai", une goutte de plasma collecté est ajoutée, mélangée et incubée à température ambiante.

3. Les gouttes sont observées toutes les heures jusqu'à 4 heures.

b) Méthode du tube:

1. Deux petits tubes à essai sont pris. Un tube à essai est marqué «test» et l'autre «contrôle». Dans chaque éprouvette, 0, 5 ml de la suspension bactérienne est prélevé.

2. Dans le tube à essai, 1 ml de plasma est ajouté, mélangé et incubé

3. Les tubes sont observés toutes les heures jusqu'à 4 heures.