Expérience visant à cultiver le virus animal dans un œuf de poulet incorporé (avec figure)

Expérience de culture de virus animal dans un œuf de poule embryonné!

Principe:

Les virus ne peuvent se développer que dans des systèmes vivants. Ils ne peuvent pas se développer dans des milieux non vivants comme la gélose nutritive ou le bouillon nutritif. Par conséquent, leur culture a besoin de cellules hôtes sensibles au virus spécifique.

Le virus tel que le bactériophage, qui infecte et se développe dans les cellules bactériennes, est cultivé en utilisant des cultures de cellules bactériennes en tant que système vivant.

Par exemple, le virus du coliphage (un bactériophage) est cultivé en utilisant la culture de la bactérie E. coli. En revanche, les virus animaux, qui infectent et se développent dans le corps des animaux, nécessitent des systèmes d'animaux vivants sensibles.

Les trois systèmes d'animaux vivants utilisés pour la culture de virus animaux dans les laboratoires sont les suivants:

1. Animaux sensibles:

Dans cette technique, le virus à cultiver est autorisé à se développer dans le corps d'un animal vivant tel que la souris ou le cobaye, qui est sensible à ce virus. Cette technique n'est plus utilisée après avoir été remplacée par les techniques plus récentes, efficaces et économiques suivantes.

2. Culture tissulaire:

C'est une technique très sophistiquée. Ici, les cellules animales connues pour être sensibles au virus à cultiver et également pour se multiplier rapidement sont d'abord isolées à partir de tissu vivant approprié d'un animal. Ces cellules sont placées dans un récipient en verre ou en plastique contenant un milieu nutritionnel extrêmement riche. Les cellules se fixent à la surface du vaisseau et continuent à se diviser jusqu'à ce que toute la surface soit recouverte d'une monocouche de cellules confluente. C'est ce qu'on appelle la culture tissulaire.

Ensuite, le virus à cultiver est inoculé à la culture de tissu susceptible. Le virus infecte les cellules vivantes de la culture tissulaire, subvertit leur mécanisme métabolique et se réplique rapidement, se développant ainsi abondamment dans les cellules.

3. Œufs de poussin embryonnés:

Dans cette technique simple et économique, le virus à cultiver est injecté dans un œuf de poule embryonné. Le virus se développe dans l'œuf de poulet vivant et provoque une maladie dans l'embryon, se traduisant par plusieurs symptômes de la maladie (effets cytopathogènes) spécifiques à ce virus. La présence de ces symptômes indique la croissance de ce virus dans l'œuf.

Matériaux nécessaires:

Deux œufs de poule embryonnés, dispositif de mirage, teinture d'iode, coton absorbant, alcool à 70%, petite perceuse, dilution 1: 2 du virus de Newcastle, seringue, vasper stérile, solution saline stérile, boîtes de Pétri, bec bunsen, chambre à écoulement laminaire, bocal, incubateur.

Procédure:

1. Deux œufs de poule embryonnés sont mirés en utilisant un appareil de mirage pour démontrer la viabilité de l'embryon. L'embryon est viable s'il montre un mouvement en réponse à la chaleur de la lumière. Les positions de la poche d'air et des gros vaisseaux sanguins sont également déterminées et marquées sur la coquille de l'œuf pendant le mirage (figure 8.7).

2. La coque est désinfectée avec de la teinture d’iode au-dessus du sac gonflable puis laissée sécher. Le même endroit est tamponné avec un coton absorbant imbibé d'alcool à 70%.

3. La pointe d'une petite perceuse est stérilisée en la plongeant dans de l'alcool à 70% puis en la flambant.

4. En utilisant cette perceuse, un petit trou est fait de manière aseptique sur la coque au-dessus du sac gonflable dans une région éloignée des vaisseaux sanguins.

5. À l'aide d'une seringue stérilisée, 0, 2 ml de la dilution 1: 2 du virus de Newcastle sont injectés de manière aseptique dans la cavité allantoïque de l'un des deux œufs. Pour ce faire, maintenez l’oeuf en position verticale, insérez l’aiguille de la seringue à 45 ° à travers le trou de la coquille, percez la membrane de la poche à air et pénétrerez dans la cavité allantoïdienne. Cet œuf inoculé par un virus sert «d'œuf d'essai».

6. Après l'inoculation, l'aiguille est retirée et le trou de la coque est obturé avec un vasper chaud stérile.

7. En utilisant la même technique, 0, 2 ml de solution saline stérile est inoculé dans l'autre œuf de poule embryonné, qui sert «d'œuf de contrôle».

8. Les deux œufs sont incubés à 37 ° C pendant 3 à 4 jours dans un incubateur à humidité adéquate.

9. Les observations sont notées chaque jour.

10. Une fois le décès déterminé, l’embryon est détaché de sa coquille et son contenu est versé dans une boîte de Pétri et de nouveau observé.

11. Tous les matériaux contaminés sont jetés dans un bécher contenant de la poudre de blanchiment.

Observations:

1. Les œufs sont confus tous les jours pendant l'incubation et la mort embryonnaire est observée, comme en témoigne la cessation des mouvements, qui survient généralement 3 à 4 jours après l'inoculation du virus.

2. Une fois le décès déterminé, l’embryon est retiré de sa coquille et le contenu est versé dans une boîte de Pétri. Il est observé pour des lésions nécrotiques et des signes d'hémorragie.

3. L'œuf témoin est examiné pour rechercher des preuves d'effets cytopathogènes.

4. Les observations sont consignées dans le tableau 8.2.