Expérience visant à déterminer la capacité des bactéries à décarboxyler différents acides aminés (avec figure)

Expérimentez pour découvrir la capacité des bactéries à décarboxyler différents acides aminés!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de décarboxyler différents acides aminés en amines et en CO _{2 correspondants,} car elles peuvent produire les enzymes 'décarboxylase d'acide aminé' respectives.

Parmi elles, chaque bactérie ne peut décarboxyler que certains des acides aminés, alors qu'elle ne peut décarboxyler les autres.

Ainsi, les acides aminés qu'une bactérie peut décarboxyler et les acides aminés, ce qu'elle ne peut pas, est caractéristique de la bactérie. Le test de l'acide aminé décarboxylase est effectué pour tester séparément la capacité d'une bactérie à décarboxyler des acides aminés tels que la lysine, l'ornithine et l'argentine avec une production de CO2 et d'amines respectives telles que la cadavérine, la putrescine et l'agmatine.

Si les bactéries peuvent

décarboxyler un ou plusieurs des acides aminés, des amines respectives sont produites, qui sont alcalines (basiques) et, par conséquent, augmentent le pH en changeant la couleur du pourpre de bromocrésol du jaune au violet.

Dans le test de l'acide aminé décarboxylase, la bactérie à tester est cultivée de manière anaérobie dans un bouillon contenant du glucose, du pourpre de bromocrésol et l'un des acides aminés. La couleur du bouillon passe initialement du violet au jaune en raison de la baisse du pH résultant des acides produits par la fermentation du glucose. Si la bactérie a la capacité de décarboxyler l'acide aminé, la couleur du bouillon passe du jaune au violet.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, boucle d’inoculation, autoclave, brûleur bunsen, chambre à flux laminaire, bocal, incubateur, bouillon de décarboxylase d’acides aminés, acides aminés (lysine, ornithine, arginine), paraffine liquide, colonies isolées ou cultures pures bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu de bouillon décarboxylase d'acides aminés (contenant principalement du glucose et du pourpre de bromocrésol) ou de sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 400 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 400 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 500 ml. en secouant et en tourbillonnant (figure 7.11).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 2 en utilisant HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou en utilisant NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon de 400 ml est réparti dans quatre fioles coniques de 250 ml, de sorte que chaque fiole contienne 100 ml du bouillon.

4. Trois acides aminés, tels que la lysine, l'ornithine et l'arginine, sont ajoutés séparément à 0, 5 de ces flacons (0, 5 gramme chacun) et l'un est conservé sans aucun acide aminé pour servir de témoin. La commande sert à distinguer les changements de couleur en deux étapes dans le support de test (du violet au jaune et du jaune au violet).

5. Les bouillons dans les quatre fioles coniques sont répartis dans quatre ensembles séparés de tubes à essai (environ 10 ml chacun), bouchés avec du coton, recouverts de papier kraft et ligotés avec du fil ou une bande de caoutchouc.

6. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

7. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

8. La paraffine liquide est stérilisée par chauffage à 180 ° C pendant 3 heures dans un four à air chaud.

9. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

10. La paraffine liquide stérilisée est doucement versée de manière aseptique dans les tubes inoculés (environ 1 cm de hauteur sur le milieu) pour créer une condition anaérobie.

11. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C dans un incubateur et observés quotidiennement jusqu'à ce que le test soit positif ou pendant une période maximale de 4 jours.