Expérience: Test de mobilité d'une bactérie: par préparation d'une goutte suspendue (avec figure)
Essayez d'effectuer un test de motilité d'une bactérie, en préparant une goutte suspendue, pour déterminer si elle est mobile ou non.
Objectif:
La motilité signifie la capacité de mouvement par son propre pouvoir. Sur la base de la motilité, les bactéries peuvent être divisées en deux groupes comme suit.
(1) Bactéries motiles:
Une bactérie, qui a la capacité intrinsèque de se déplacer dans le milieu environnant, dans lequel elle reste en suspension, est une bactérie mobile.
(2) Bactéries non-motiles:
Une bactérie, qui ne possède pas la capacité intrinsèque de mouvement dans le milieu environnant, dans laquelle elle reste en suspension, est une bactérie non motile. Les bactéries non mobiles peuvent présenter une motilité apparente, résultant de leur mouvement brownien provoqué par le bombardement des molécules d'eau dans le milieu environnant, sur les cellules de la bactérie.
En montage humide, bien que la forme et la taille des bactéries puissent être observées, la motilité peut être entravée, la suspension étant pressée entre la lame et la lamelle. C'est pourquoi; la préparation des gouttes pendantes ou le test de motilité est effectué pour une observation claire de la motilité des bactéries, ainsi que de leur forme et de leur taille. C'est utile dans l'identification des bactéries.
Principe:
Une très petite goutte de suspension de bactéries est suspendue au centre d'une lamelle dans la cavité d'une glissière à cavité. La goutte pendante est observée au microscope à l'aide d'un objectif à immersion dans l'huile. Si les bactéries sont mobiles, on peut voir que ses cellules ont un mouvement erratique dans le milieu environnant.
En revanche, si elle est non mobile, ses cellules restent statiques dans le milieu sans aucun mouvement ou peuvent présenter un mouvement brownien résultant du bombardement par les molécules d’eau du milieu, sur les cellules bactériennes.
Matériaux nécessaires:
Lame creuse, lamelle couvre-objet, vaseline ou vaseline, huile d'immersion, culture en bouillon de bactéries âgée de 24 heures, boucle et microscope (composé, champ noir ou contraste de phase).
Procédure:
1. Une lame d'empreinte est nettoyée correctement sous l'eau du robinet, de sorte que l'eau ne reste pas sous forme de gouttes à la surface. Une lame de cavité est une lame de verre avec une petite dépression ronde au centre, dans laquelle une petite goutte de suspension de bactéries peut pendre (Figure 5.3).
2. La lame est séchée en essuyant avec du papier absorbant puis en la déplaçant sur une flamme ou en la laissant au soleil.
3. Un anneau de vaseline est appliqué autour de la cavité.
4. Une boucle est stérilisée à la flamme et refroidie. Une suspension de bactéries est prélevée de manière stérile dans une culture de bouillon âgée de 24 heures. Une petite goutte de suspension est placée au centre d'une lamelle. La culture en bouillon ne devrait pas être âgée de plus de 24 heures, car les bactéries pourraient perdre leur mobilité en vieillissant.
5. La glissière à cavité est inversée et placée sur la lamelle de manière à ce que la cavité recouvre la goutte.
6. La lame et la lamelle sont pressées doucement pour que la cavité soit scellée. Il faut veiller à ce qu'aucune partie de la cavité ne touche la goutte.
7. La lame est rapidement inversée, de sorte que la goutte reste suspendue dans la cavité sans la toucher.
8. La lame est clipsée sur la platine du microscope.
9. Le bord de la goutte est concentré sous l'objectif de faible puissance.
Les raisons pour focaliser le bord de la goutte sont les suivantes:
(a) Un meilleur contraste est obtenu grâce à la différence d'indice de réfraction de la goutte et de la lamelle.
(b) Lorsque la goutte s'accroche, elle s'amincit vers le bord, pour lequel le bord contient moins de bactéries à observer clairement pour la motilité.
(c) Habituellement, les bactéries aérobies s'approchent du bord pour obtenir plus d'oxygène pour la respiration, ce qui permet de les observer au bord.
10. Une goutte d'huile d'immersion est placée sur la lamelle juste au-dessus de la goutte pendante et le bord de la goutte pendante est observé sous l'objectif d'immersion d'huile du microscope. De préférence, un microscope à contraste de phase ou à champ noir devrait être utilisé pour une observation claire.
Observations (objectif sous immersion dans l'huile):
1. la motilité:
Motile ou non-motile
2. Forme des bactéries:
Sphérique (coccus)
En forme de baguette (bacilles)
Comme une virgule
Spirale (spirochètes)
3. Disposition des bactéries:
Paires (diplobacillus / diplococcus)
À quatre (tétrades)
En chaînes (streptocoque / streptobacille)
Grappes de type raisin (staphylocoque)
Cuboïdal (sarcinae ou octet).
4. Taille des bactéries:
Par estimation oculaire, dessinez le champ sous l'objectif d'immersion dans l'huile.
(3) coloration:
But de la coloration:
L'indice de réfraction des cellules bactériennes est très proche de celui de l'eau, dans lequel elles sont en suspension lors de l'observation, ainsi que de celui de la lame de verre, sur laquelle elles sont observées au microscope. Par conséquent, il est très difficile de les observer clairement.
Pour surmonter cette difficulté, les cellules sont colorées par des taches qui leur donnent une couleur profonde et une couleur claire au milieu environnant dans lequel elles sont suspendues. Les cellules de couleur foncée obtiennent un contraste clair avec le fond de couleur claire et peuvent être clairement observées.
Ainsi, la coloration est une méthode de coloration des microorganismes transparents, par ailleurs incolores, à l’aide de divers colorants biologiques appelés «taches» pour leur observation au microscope.
Chimie des taches:
Les agents colorants sont de trois types:
1. teintures:
Ils sont utilisés pour la coloration à usage général, par exemple pour colorer les matières textiles et pour colorer les murs.
2. taches:
Ils sont utilisés pour colorer des échantillons biologiques ou microbiologiques. Ce sont plus précis et exigeants.
3. Indicateurs:
Ce sont des produits chimiques qui changent de couleur avec le changement de la concentration en ions hydrogène (pH).
Bien que «tache» soit le terme approprié, le terme «colorant» est largement utilisé en microbiologie pour désigner les agents colorants. Dans le passé, les colorants naturels étaient préparés à partir de différentes plantes. Ils ont été largement remplacés par des colorants synthétiques.
Comme le premier colorant synthétique a été préparé à partir d'aniline, tous les colorants synthétiques sont appelés «colorants à l'aniline». Cependant, la plupart de ces colorants sont maintenant produits à partir de goudron de houille pour lequel ils sont maintenant appelés «colorants de goudron de houille». Les colorants de goudron de houille sont des dérivés du benzène. Une molécule de colorant comprend trois composants (figure 5.4), comme indiqué ci-dessous.
(a) un cycle benzénique
(b) Un groupe chromophore
(c) Un groupe auxochrome
Le benzène est un solvant organique incolore, tandis que le chromophore est le composant colorant du colorant. Le benzène se combine au chromophore pour former un chromogène (Figure 5.5). Comme le chromogène ne possède pas la propriété de se dissocier, il ne peut pas se combiner avec les cellules et est facilement lavé.
Lorsqu'un chromogène se combine à un auxochrome, un colorant ou une coloration se forme. L'auxochrome confère au colorant la propriété de dissociation électrolytique (propriété de formation de sel). Ainsi, chimiquement, une tache est définie comme un composé organique contenant un cycle benzène, un groupe chromophore et un groupe auxochrome.
Types de coloration:
La coloration des bactéries est de différents types, comme décrit ci-dessous (Figure 5.6).
I. Simple coloration:
Ici, une seule tache est utilisée. Cette coloration est utilisée pour observer la forme (cocci, bacilles, vibrions, spirilles) et l'arrangement (simple, paire, tétrade, chaîne, amas) de bactéries.
Il est de deux types comme suit:
A. Coloration de base:
Dans la coloration de base, une coloration de base, telle que le bleu de méthylène, le violet de cristal ou le carbol-fuchsine, est utilisée pour colorer les cellules bactériennes. La tache se lie étroitement aux cellules de la bactérie et confère aux cellules une couleur profonde, tandis que le milieu environnant prend une couleur claire.
B. Coloration acide:
En coloration acide, une coloration acide, comme l'éosine ou la nigrosine, est utilisée pour colorer les cellules bactériennes de manière négative. La tache rend les couleurs environnantes colorées, tandis que les cellules bactériennes restent incolores.
II. Coloration différentielle:
Ici, plus d'une tâche est utilisée. Il est effectué aux fins suivantes.
A. Séparation en groupes:
Ces méthodes de coloration différentielle sont utilisées pour différencier les bactéries en différents groupes en fonction de leurs caractéristiques de coloration.
Ces méthodes incluent les suivantes:
(une) Coloration de Gram:
Cette méthode de coloration est réalisée pour différencier les bactéries à Gram positif et négatif.
(b) Coloration acide-rapide:
Il est effectué pour différencier les bactéries acido-résistantes des bactéries non acido-résistantes.
B. Visualisation de structures spécifiques de bactéries:
Ces méthodes de coloration différentielle sont réalisées pour visualiser des composants structurels spécifiques de cellules bactériennes.
Ces méthodes incluent les suivantes:
(une) Coloration des spores:
Cette méthode de coloration est utilisée pour colorer les endospores des bactéries responsables de la formation de spores.
(b) Capsule Coloration:
Cette méthode est utilisée pour colorer la capsule, qui entoure les bactéries encapsulées.
(c) Flagella Coloration:
Il est effectué pour visualiser les flagelles des bactéries flagellées.
(ré) Coloration d'inclusion:
Ce procédé de coloration est effectué pour colorer les inclusions cellulaires de cellules bactériennes telles que des granules de volutine, des granules de glycogène et des granules de PBH.
