Expérience de coloration de base des bactéries pour en observer la forme, la taille et la disposition

Essayez d’effectuer une simple coloration de base des bactéries afin d’en observer la forme, la taille et la disposition.

Objectif:

Il n'est pas possible d'observer la forme, la taille et la disposition naturelles des bactéries par une coloration de base, car ces caractéristiques sont altérées par la fixation à la chaleur.

En outre, certaines bactéries (par exemple les spirilles) sont difficiles à colorer.

Ainsi, la coloration négative est effectuée pour les deux raisons suivantes:

(une) Observer la forme, la taille et la disposition naturelles des bactéries, car aucune fixation à la chaleur n’est effectuée ici.

(b) Pour observer ces bactéries, qui sont difficiles à colorer?

Principe:

Les cellules bactériennes portent à leur surface une charge négative qui les entoure de cations tels que Na ⁺ et K ⁺ (Figure 5.9). Dans la coloration acide, on utilise une coloration acide qui se ionise en un chromogène anionique (ion colorant chargé négativement) et un cation.

Les chromogènes chargés négativement sont repoussés par les charges négatives de surface des cellules bactériennes, ce qui empêche le colorant de pénétrer dans la cellule. Maintenant, les cellules non colorées sont facilement discernables sur le fond coloré.

Matériaux nécessaires:

Lames, boucle, colorant acide (éosine / nigrosine), bouillon / plaque / culture inclinée de bactéries, microscope, huile d'immersion.

Procédure:

1. Une lame est correctement nettoyée sous l'eau du robinet, de sorte que l'eau ne reste pas sous forme de gouttes à sa surface (Figure 5.10).

2. L'eau adhérente est essuyée avec du papier absorbant et la lame est séchée à l'air.

3. Une petite goutte de colorant acide (nigrosine / éosine) est placée près d'une extrémité de la lame.

4. Une boucle est stérilisée à la flamme et refroidie. De manière aseptique, une boucle de bactéries de la gélose ou en biais ou une boucle de suspension de bactéries d'un bouillon liquide est transférée sur la goutte de coloration. Une suspension de bactéries dans la tache est obtenue en mélangeant délicatement la boucle de bactéries dans la goutte de tache, de manière à ce que la goutte ne se propage pas.

5. Une autre lame propre est maintenue à un angle de 30 ° par rapport à la première, de sorte qu'un bord étroit de la première touche la surface de la dernière vers la fin sans la goutte de tache.

6. Dans cette position inclinée, la deuxième lame est tirée en avant vers la goutte de tache, jusqu'à ce que son bord touche juste la goutte et que la goutte se répande le long de son bord.

7. Dans cette position inclinée, la deuxième lame est poussée en arrière pour former un mince frottis de bactéries.

8. Le frottis est séché à l'air. La fixation à la chaleur ne se fait pas ici.

9. La lame est fixée sur la platine du microscope et le frottis est observé sous des objectifs de faible puissance et de forte sécheresse.

10. Une goutte d'huile d'immersion est appliquée sur le frottis.

11. Le frottis est observé sous l'objectif d'immersion dans l'huile.