Hybridation in situ fluorescente (FISH)

Dans cet article, nous discuterons de l'hybridation fluorescente in situ (FISH).

C'est une technique de laboratoire utilisée pour déterminer le nombre de copies du segment spécifique de l'ADN présent dans une cellule. Il identifie une région chromosomique spécifique dans les préparations cytologiques. En laboratoire, un segment d’ADN est modifié chimiquement ou coloré par un colorant fluorescent. Lorsqu’il est examiné au microscope à fluorescence, il est fluorescent de couleur très vive.

L'hybridation in situ en fluorescence a considérablement augmenté la sensibilité, la spécificité et la résolution de l'analyse chromosomique.

Les avantages de cette technique sont nombreux mais certains sont mentionnés comme suit:

(1) La résolution de cette méthode est bien meilleure que celle des bandes chromosomiques traditionnelles et d’une longueur d’environ 2 méga-bases (Mo).

(2) Le protocole de cette technique est simple et s’applique aussi bien aux cellules en division qu'aux cellules ne se divisant pas. Cette technique peut identifier une gamme de mutations comprenant la suppression, la duplication, l'aneuploïdie et la présence de chromosomes dérivés. Cette technique est également couramment utilisée pour surveiller les maladies récurrentes ou résiduelles chez les patients transplantés de moelle osseuse.

L'hybridation FISH (fluorescence in situ) est généralement effectuée sur du sang périphérique stimulé à la fois pour l'analyse chromosomique et pour l'identification de la translocation et de la délétion spécifiques. Par exemple, il est utilisé pour démontrer le chromosome de Philadelphie (Ph 1 ) formé par la translocation entre les chromosomes 9 et 22 et provoque une leucémie myéloïde chronique (LMC).

Il est également utilisé dans l'identification de la translocation entre les chromosomes 8 et 14, responsables du lymphome de Burkitt, et entre les chromosomes 18 et 14, responsables de la leucémie à cellules B. Il est également utilisé pour le diagnostic du syndrome de Down.

Dans la procédure FISH, des cultures de cellules peuvent être préparées. Les chromosomes en métaphase / prométaphase sont fixés sur une lame de verre. De plus, FISH peut être modifié pour l'analyse des noyaux en interphase. Ensuite, les chromosomes sont dénaturés; une sonde ADN marquée est ensuite introduite, puis hybridée sur le chromosome sur la lame. Par conséquent, le terme «hybridation in situ» est donné.

Les sondes d'ADN sont marquées au fluorochrome, une telle sonde donne un signal fluorescent et pourrait être vue en microscopie à fluorescence. La fluorescence peut être déduite à l’aide de filtres fixés au microscope à fluorescence.

Les sondes FISH mesurent environ 40 kilo-bases (kb) et sont détectées sous forme d'un double signal fluorescent sur chaque membre d'une paire de chromosomes. Le double point correspond aux signaux de chacune des deux chromatides soeurs alignées.

Dans son application simple, un motif FISH normal pour une telle sonde serait constitué de deux ensembles de doubles points, un ensemble pour chaque membre des chromosomes normalement appariés. Ces doubles points fusionnent souvent pour former un seul signal. Les cellules monosomiques pour la région chromosomique en question ne montreraient qu'un seul ensemble de doubles points par noyau, tandis que les cellules trisomiques afficheraient trois ensembles de doubles points.