Test au méthyle rouge pour déterminer l'aptitude d'une bactérie à utiliser le glucose (avec figure)

Lisez cet article pour en savoir plus sur le test du rouge de méthyle (test MR), afin de déterminer la capacité d’une bactérie à utiliser le glucose avec la production d’un acide stable comme produit final!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité d'utiliser le glucose et de le convertir en un acide stable tel que l'acide lactique, l'acide acétique ou l'acide formique en tant que produit final.

Ces bactéries métabolisent initialement le glucose en acide pyruvique, qui est ensuite métabolisé par la voie des acides mixtes pour produire l'acide stable.

Le type d'acide produit diffère d'une espèce à l'autre et dépend des voies enzymatiques spécifiques présentes dans la bactérie. L'acide ainsi produit diminue le pH à 4, 5 ou moins, ce qui est indiqué par un changement de couleur du rouge de méthyle du jaune au rouge.

Dans le test au rouge méthylique (test MR), les bactéries testées sont cultivées dans un bouillon contenant du glucose. Si la bactérie est capable d'utiliser le glucose avec la production d'un acide stable, la couleur du rouge de méthyle passe du jaune au rouge lorsqu'elle est ajoutée à la culture en bouillon.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, bouchons en coton, boucle d’inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal, étuve, incubateur, bouillon MR-VP (bouillon de méthyle rouge de Voges Proskauer ou de phosphate de glucose), solution de méthyl rouge, colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu de bouillon MR-VP (contenant du glucose comme composant principal) ou de sa poudre prête à l'emploi requise pour 100 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml en agitant tourbillonnant. Le bouillon MR-VP est également appelé bouillon de phosphate de glucose (Figure 7.4).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 6, 9 à l'aide d'HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon est réparti dans cinq tubes à essai (environ 10 ml chacun) bouchés avec du coton, recouverts de papier kraft et noués avec du fil ou une bande de caoutchouc.

4. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

5. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

6. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

7. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C pendant 24 à 48 heures dans un incubateur.

8. Une solution alcoolique de rouge de méthyle (3-4 gouttes) est déposée dans chaque tube à essai.

Observations:

1. Couleur rouge produite: IRM positive (c’est-à-dire que la bactérie a converti le glucose en acide stable, comme indiqué par la conversion du rouge de méthyle de la couleur jaune en rouge. Cela indique une fermentation acide mixte).

2. Couleur rouge non produite: MR négatif (le glucose dans le milieu n’a pas été converti en acide stable. Cela indique une fermentation du butylène glycol).