Phénylalanine Deaminize Test sur bactéries afin de déterminer leur capacité à désacraliser l'acide aminé (avec figure)

Lisez cet article pour en savoir plus sur le test de désaminage à la phénylalanine sur bactéries afin de déterminer leur capacité à déminer l’acide aminé!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de désaminer l'acide aminé phénylalanine, car elles peuvent produire l'enzyme «phénylalanine désaminase».

Cette enzyme désamine la phénylalanine en éliminant son groupe amino, produisant ainsi de l'acide phénylpyruvique (un acide cétonique) et de l'ammoniac (NH ₃ ). L'acide phénylpyruvique forme une couleur verte avec une solution de chlorure ferrique.

Dans le test à la phénylalanine désaminase, la bactérie à tester est cultivée sur des géloses inclinées contenant de la phénylalanine. Si les bactéries ont la capacité de désaminer la phénylalanine, la couleur des pentes passe du jaune au vert en cas de chute de la solution de chlorure ferrique sur celle-ci.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, boucle d'inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal à incandescence, incubateur, gélose à la phénylalanine, solution de chlorure ferrique (10%), colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu agar phénylalanine (contenant principalement de la phénylalanine) ou de sa poudre prête à l'emploi requise pour 100 ml de milieu sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml par agitation et tourbillonnement ( Figure 7.17).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 2 en utilisant HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou en utilisant NaOH 0, 1 N s'il est inférieur.

3. Le ballon est chauffé pour dissoudre complètement la gélose dans le milieu.

4. Avant de se solidifier, le milieu à l'état fondu et chaud est réparti dans 5 tubes à essai (environ 20 ml chacun).

5. Les éprouvettes sont en coton bouché, recouvertes de papier kraft et nouées avec du fil ou une bande de caoutchouc.

6. Ils sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

7. Après la stérilisation, ils sont retirés de l'autoclave et maintenus dans une position inclinée pour refroidir et solidifier le milieu, de manière à obtenir une inclinaison de la gélose à la phénylalanine.

8. Les bactéries à tester sont ensemencées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, par stries sur la surface des pentes à l'aide d'une boucle stérilisée à la flamme. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

9. Les pentes inoculées sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures dans un incubateur.

10. 4-5 gouttes de solution de chlorure ferrique (10%) sont ajoutées à chaque angle.