Notes d'étude sur la cytométrie en flux avancé

L'article mentionné ci-dessous fournit des notes d'étude sur la cytométrie en flux avancée.

La cytométrie en flux est la technique récente mise au point au cours des deux dernières décennies pour étudier le contenu des cellules, notamment l'efficacité du tassement nucléaire. Outre les NPE, les caractéristiques physiques et chimiques du contenu des différentes cellules et les conditions pathologiques pourraient être analysées rapidement avec une conclusion correcte.

Les cytomètres de flux sont disponibles sur le marché sous la forme d'une machine. La machine consiste en un système de fluide, un système optique permettant de collecter les signaux lumineux générés sous la forme de cellules traversant le laser. La machine est également dotée d'un système électronique qui convertit les signaux lumineux en signaux électroniques proportionnels qui sont finalement numérisés pour une analyse informatique.

Environ 5000 cellules par seconde, mesurées individuellement les unes après les autres, à partir de la suspension d'une population hétérogène pourraient être balayées.

Le système Fludics au design sophistiqué est doté de lasers, d'optiques, d'électronique et de tri. Le système Fludics est doté d’un système de tri de cellules activé par fluorescence (système de fluides FACS Calibur). Lors de ce tri, il peut trier la précision du nombre de cellules individuelles.

Le résultat est une grande pureté avec une récupération qui se situe entre Single cell et Recovery. Il est contrôlé électroniquement avec trois boutons pour sélectionner les modes opérationnel PRIME, STAND BY et RUN. Les taux sont les contrôles aussi haut; (60 ul / min.), Moyen (35 ul / min) et faible (12 ul / min).

L’excitation et l’émission, les fluorochromes, les filtres et la compensation de couleur constituent la partie importante de l’équipement. Le filtre 530/30 BP mesure les signaux émis par l'isothiocyanate de fluorescence (colorant). Si l'on utilise de la phycoérythrine et de l'iodure de popidium, un filtre BP 585/42 est utilisé. 650 filtres LP sont utilisés si la chlorhydrine de péridinine et le signal 7-amino-actinomycine D sont générés.

Les signaux laser sont lus par le logiciel de recherche de cellules Becton Dickinson. Le détecteur de fluorescence et les filtres de bande doivent être ajustés conformément aux instructions et aux exigences de l'instrument. Des sources de lumière laser à argon à 488 nm et un filtre passe-bande à 623 nm sont couramment présents dans les équipements.

C'est aussi avoir un système pour afficher des données et des analyses. Les paramètres importants sont les histogrammes, les données multiparamètres, les données en mode liste et la synchronisation. L'analyse automatique des données à l'aide du logiciel fourni fournit des histogrammes du contenu de l'ADN et un nombre qui sont affichés automatiquement sur l'ordinateur (49.2).

Les applications du cytomètre de flux sont nombreuses et constituent une aubaine pour la recherche biologique et pour les investigations cliniques dans de nombreuses maladies humaines. Le cytomètre de flux est utilisé pour l’étude des lignées de sang dans le tissu hémopoïétique des cellules rénales de la tête des poissons respirant de l’air.

Il est facile de faire la distinction entre la cellule souche hématopoïétique pluripotente et le phénotype de la population lymphocytaire périphérique mature et fonctionnelle. L’utilisation importante de cet équipement est d’étudier l’apoptose ou la mort cellulaire ainsi que la nécrose des cellules due à la toxicité des pesticides.

En raison des signaux de diffusion grand angle, il est possible de résoudre les lymphocytes, les monocytes et les granulocytes à partir d'un échantillon de sang total lysé. Il est également possible de séparer les plaquettes du bruit de fond. Il est utilisé pour le système immunitaire et en immunophénotypage. Il est utilisé pour étudier la leucémie et le lymphome, la recherche sur la transplantation, le dénombrement des réticulocytes et l'analyse du contenu en ADN cellulaire.

En raison du mécanisme de traitement des impulsions, il est avantageux pour l'analyse du cycle cellulaire de l'ADN. L'analyse des NPE est utilisée pour différencier le cancer primitif du sein et les métastases, le cancer primitif du côlon et les métastases du côlon, ainsi que les cancers gastrique et ovarien (Fig. 49.2).

Le protocole utilisé est que les premières cellules ont été retirées et fixées dans du paraformaldéhyde à 3%. Ils sont perméabilisés avec 0, 5% de Triton x 100. L'ADN nucléaire a ensuite été marqué avec de l'iodure de popidium après traitement par la RNase en utilisant le kit cycle Test Plus DNA.