Triple test de fer et de sucre sur des bactéries pour déterminer la capacité à produire du sulfure d'hydrogène (avec figure)
Lisez cet article pour en savoir plus sur le test du triple sucre du fer sur les bactéries pour découvrir la capacité à produire du sulfure d'hydrogène!
Essayez d’effectuer un triple test du fer sur le sucre (test TSI) pour déterminer la capacité d’une bactérie à utiliser l’un ou plusieurs des trois sucres, tels que le glucose, le saccharose et le lactose, ainsi que son aptitude à produire de l’hydrogène sulfuré (H 2). S), qui réduit le fer.
Principe:
Certaines bactéries peuvent utiliser un ou plusieurs des trois sucres tels que le glucose, le saccharose et le lactose.
Si un ou plusieurs des trois sucres (sucres triples) sont utilisés, un acide est produit, ce qui réduit le pH en modifiant la couleur du rouge phénol du rouge au jaune.
De plus, certaines bactéries ont la capacité de produire de l'hydrogène sulfuré (H 2 S) en utilisant des composés soufrés. L’H 2 S ainsi obtenu se combine avec le composé de fer, le sulfate ferreux, pour former des précipités noirs de sulfure ferreux.
Dans le test du triple sucre ferreux (test TSI), la bactérie à tester est cultivée sur des géloses inclinées contenant du glucose, du saccharose, du lactose, du rouge phénol, du thiosulfate de sodium et du sulfate ferreux. Alors que le milieu contient du glucose (à savoir du D-glucose ou du dextrose) à une faible concentration de 0, 1%, la concentration de saccharose et de lactose est maintenue élevée à 1%.
Si les bactéries peuvent utiliser un ou plusieurs des trois sucres, la couleur du milieu passe du rouge au jaune. Si les bactéries ont la capacité de produire de l'H 2 S, le milieu acquiert une couleur noire. Comme trois sucres et un composé de fer sont utilisés dans le milieu, le test est appelé test de fer triple sucre.
Matériaux nécessaires:
Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, aiguille à inoculer, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, pot à incubateur, incubateur, gélose à triple sucre de fer (TSI), colonies isolées ou cultures pures de bactéries.
Procédure:
1. Les ingrédients du milieu gélose TSI (contenant les 3 sucres et le fer comme composants principaux) ou de sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 100 ml de milieu sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml. secouant et tourbillonnant (figure 7.7).
2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 4 en utilisant HCI 0, 1 N s'il est supérieur ou à l'aide de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur.
3. Le ballon est chauffé pour dissoudre complètement la gélose dans le milieu.
4. Avant de se solidifier, le milieu à l'état fondu et chaud est réparti dans 5 tubes à essai (environ 20 ml chacun).
5. Les éprouvettes sont en coton bouché, recouvertes de papier kraft et nouées avec du fil ou une bande de caoutchouc.
6. Ils sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.
7. Après la stérilisation, ils sont sortis de l'autoclave et maintenus dans une position inclinée pour refroidir et solidifier le milieu, de manière à obtenir une inclinaison de la gélose TSI.
8. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans les pentes en coupant à l'aide d'un couteau dans le mégot et en laissant des stries sur la surface des pentes à l'aide d'une aiguille stérilisée à la flamme. L'aiguille est stérilisée après chaque inoculation.
9. Les pentes inoculées sont incubées à 37 ° C pendant 24 heures dans un incubateur.
Observations:
1. Fesses jaunes et pentes rouges avec ou sans production de gaz (ruptures dans la gélose):
Un mégot acide et une pente alcaline ont été formés. Dans ce cas, seul le glucose a été utilisé par voie anaérobie (fermentation) rendant le mégot acide (jaune). Aucun autre sucre n'a été utilisé. La concentration de glucose étant inférieure (0, 1%), la faible quantité d'acide produite sur la surface inclinée s'oxyde rapidement, ce qui la rend alcaline (rouge).
De plus, la domination oxydative de la peptone présente dans le milieu produit du NH Y qui rend alcaline oblique (rouge). Cependant, dans les fesses, les conditions acides sont maintenues en raison de la disponibilité réduite en oxygène et du ralentissement de la croissance des bactéries. Ainsi, la bactérie est glucose positif.
2 Fesses jaunes et jaune inclinées avec ou sans production de gaz:
Un bout acide et une pente acide ont été formés. Ici, le lactose et / ou le saccharose ont été fermentés. Étant donné que leur concentration dans le milieu est élevée, ils produisent une grande quantité d’acides, ce qui entraîne la formation d’une pente acide et d’un bout acide, tout en maintenant les conditions acides. Ainsi, la bactérie est positive au saccharose / lactose.
3 Fesses rouges et pentes rouges:
Aucun des trois sucres n'a été fermenté. Au lieu de cela, les peptones ont été catabolisées dans des conditions anaérobies et / ou aérobies, donnant lieu à une condition alcaline due à la production d'ammoniac.
Si seule une dégradation aérobie des peptones se produit, seule la surface inclinée devient alcaline (rouge). En cas de dégradation aérobie et anaérobie de la peptone, l'inclinaison et le mégot deviennent alcalins (en rouge). Ainsi, la bactérie est sucre négatif.
4 Noircissement de la crosse:
En plus de l’une des conditions ci-dessus, si le noircissement de la pâte se produit, cela indique que la bactérie est capable de produire de l’H 2 S en utilisant le soufre inorganique (thiosulfate de sodium) présent dans le milieu.
L’H 2 S se combine avec le sulfate ferreux du milieu pour former des précipités noirs de sulfure ferreux, ce qui entraîne un changement de couleur du milieu en noir. Ainsi, les bactéries sont H 2 S positives.
5 Pas de noircissement des fesses:
La bactérie n'est pas capable de produire de l'H 2 S en utilisant le soufre inorganique (thiosulfate de sodium) présent dans le milieu. Ainsi, la bactérie est H2S négative.
