Expérience de Voges-Proskauer sur les bactéries pour déterminer leur capacité à utiliser le glucose (avec figure)

Lisez cet article pour en savoir plus sur le test Voges-Proskauer (test VP) sur des bactéries afin de déterminer leur capacité à utiliser le glucose avec la production d’acétylméthylcarbinol!

Principe:

Certaines bactéries peuvent utiliser le glucose et le convertir en acétylméthylcarbinol (acétoïne), un produit final neutre.

Ces bactéries métabolisent initialement le glucose en acide pyruvique, qui est ensuite métabolisé par l’acide acétique intermédiaire métabolique en acétylméthylcarbinol (acétoïne) et en C0 2 par la voie du butylène glycol.

L'acétylméthylcarbinol est oxydé en diacétyle en présence d'a-naphtol dans des conditions alcalines (40% de KOH). Le diacétyle réagit avec le groupe guanidine de la créatine (à partir de peptone utilisée dans le milieu de culture) pour produire une couleur rose rose.

Dans le test Voges-Proskauer (test VP), les bactéries testées sont cultivées dans un bouillon contenant du glucose. Si les bactéries ont la capacité d'utiliser le glucose avec production d'acétylméthylcarbinol (acétoïne) comme produit final neutre, le bouillon acquiert une couleur rose-rose lors de l'ajout d'une solution de naphtol suivie de 40% de KOH.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, boucle d'inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal, incubateur, bouillon MR-VP (ou bouillon de phosphate de glucose), solution VP I (solution de réactif de Barritt A) et solution VP II (Solution de réactif de Barritt B), des colonies isolées ou des cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu de bouillon MR-VP (contenant du glucose comme composant principal) ou de sa poudre prête à l'emploi requise pour 100 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml en agitant tourbillonnant (figure 7.5). Le bouillon utilisé pour le test du rouge de méthyle peut également être utilisé ici. Généralement, le même bouillon est utilisé pour les deux tests (MR et VP) en même temps.

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 6, 9 à l'aide d'HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon est réparti dans cinq tubes à essai (environ 10 ml chacun) bouchés avec du coton, recouverts de papier kraft et noués avec du fil ou une bande de caoutchouc.

4. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

5. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

6. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

7. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C pendant 48 à 72 heures dans un incubateur.

8. La solution de VP I (contenant de l'α-naphtol) est versée dans les tubes de bouillon (0, 2 ml chacun) et mélangée soigneusement.

9. La solution de VP II (contenant du KOH) est versée dans les tubes de bouillon (0, 6 ml chacun), bien mélangée et laissée au repos pendant 30 minutes à 2 heures.

Observations:

1. Couleur rose rose produite: VP positif.

2. Couleur rose rose non produite: VP négatif.