Utilisations cliniques du cytomètre de flux
Utilisations cliniques du cytomètre de flux!
1. Énumération de différentes cellules (telles que les cellules T et les cellules B).
2. Détection des antigènes des cellules B et classification des hémopathies malignes (leucémies et lymphomes).
3. Détection d'antigènes à la surface des cellules myéloïdes, ce qui est utile pour le diagnostic des syndromes myélodysplasiques et de la leucémie myéloïde.
4. Les molécules de CD34 sont exprimées à la surface des cellules progénitrices de la tige hématopoïétique. Les cellules souches isolées de la moelle osseuse ou du sang périphérique sont énumérées à l'aide d'AcM marqués sur CD34, de sorte que le nombre exact de cellules souches puisse être calculé et transfusé à un patient. Les cellules souches restantes sont stockées dans de l'azote liquide et peuvent être transfusées ultérieurement au même patient, si nécessaire.
5. Phénotypage HLA Des anticorps monoclonaux marqués au chrome fluoré sont utilisés pour la liaison avec les antigènes HLA de classe I et de classe II à la surface des cellules. Les cellules colorées sont ensuite analysées (au fur et à mesure que les cellules passent en une seule colonne) dans le cytomètre en flux.
6. Détection des antigènes intracellulaires
Les cellules sont d'abord traitées avec des agents rendant la cellule perméable, sans la briser complètement.
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Ensuite, les cellules sont traitées avec des conservateurs doux pour réticuler les protéines cytoplasmiques en place et les empêcher de fuir de la cellule.
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Ensuite, les cellules sont traitées avec des AcM marqués dirigés contre des antigènes intracellulaires. Les AcM marqués pénètrent dans les cellules et se lient aux antigènes intracellulaires.
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Les cellules sont passées à travers le cytomètre en flux pour évaluer les cellules colorées.
je. La détection de la désoxynucléotide transférase terminale intracellulaire (TdT) aide à définir les tumeurs malignes précoces des cellules B. La TdT est une enzyme exprimée lors du réarrangement du gène de l'immunoglobuline, responsable de l'addition de nucléotides aléatoires aux jonctions des segments d'immunoglobuline. Par conséquent, l'expression de TdT dans une population de cellules B malignes indique un phénotype de cellules B très immature.
ii. La détection de la myéloperoxydase intracellulaire aide à la classification de divers sous-types de leucémie myéloïde.
7. Analyse du contenu en ADN des cellules. Le cytomètre de flux peut évaluer la quantité de matériel génétique dans une cellule et déterminer la fraction de phase S ou la quantité d'aneuploïdie dans une population de cellules, a. Ploïdie de l'ADN Les cellules normales contenant deux copies du chromosome sont appelées cellules diploïdes.
Toutes les cellules (à l'exception de l'ovule et du sperme) qui ne sont pas diploïdes sont considérées comme aneuploïdes et peuvent servir d'indicateur fiable de la néoplasie. Un grand nombre de cellules dans une tumeur ont une quantité aberrante d'ADN. L'analyse cytométrique en flux de l'ADN est réalisée par incubation de cellules perméabilisées avec des colorants fluorescents (tels que l'iodure de propidium).
Le colorant s'intercale dans l'ADN et devient fluorescent. La quantité de fluorescence est directement proportionnelle à la teneur en ADN de la cellule. L'efficacité de la chimiothérapie pour le cancer chez un patient peut être évaluée par analyse de la ploïdie. L'analyse de la ploïdie détermine la quantité totale d'ADN nucléaire dans les cellules tumorales individuelles. L'indice d'ADN est le rapport entre la fluorescence de l'ADN d'une cellule tumorale et la fluorescence de l'ADN d'une cellule normale. L'indice d'ADN d'une cellule diploïde normale est 1. Un indice d'ADN supérieur ou inférieur à 1 indique une tumeur aneuploïde.
b. Analyse du cycle cellulaire de l'ADN:
Le contenu en ADN des cellules à différentes phases du cycle cellulaire au cours de la réplication (c'est-à-dire phase de synthèse de l'ADN phase Gq / Gj; synthèse de l'ADN en phase S; phase de synthèse de l'ADN phase G2 / M) peut être mesuré pour évaluer la croissance cellulaire et agressivité du cancer. Plus de l'ADN est synthétisé par les cellules cancéreuses agressives. Les cellules passant par la phase S montrent une synthèse d'ADN directement proportionnelle à leur agressivité.
8. De nombreux dosages fonctionnels des leucocytes peuvent être réalisés avec un cytomètre en flux.
je. Production de O 2 - (superoxyde) comme test de dépistage de la maladie granulomateuse chronique.
9. Détection de la viabilité cellulaire:
Le colorant iodure de propidium pénètre dans les cellules aux membranes brisées et à la structure nucléaire perturbée. Par conséquent, avec l'iodure de propidium, les cellules mortes deviennent fluorescentes tandis que les cellules vivantes ne le sont pas. De plus, la fluorescence de l'iodure de propidium se situe dans la partie rouge extrême du spectre. Par conséquent, cette méthode peut être combinée avec une coloration régulière à l'AcM, dans laquelle les cellules mortes sont colorées en rouge et peuvent donc être omises de l'analyse des données.
10. Des méthodes cytométriques en flux pour détecter les cellules en apoptose sont également disponibles.
