Immunodiffusion d'antigène ou d'anticorps

Immunodiffusion d'antigène ou d'anticorps!

L'immunodiffusion fait référence au mouvement d'antigène ou d'anticorps ou à la fois de molécules d'antigène et d'anticorps dans un milieu de support par diffusion.

L'antigène et l'anticorps se lient l'un à l'autre et forment un immuno-précipité insoluble visible à l'œil nu sous forme de bande ou de trait de précipitine. J. Oudin a décrit un système de diffusion unique d'antigène et d'anticorps dans des tubes remplis de gélose.

Bientôt, Ouchterlony a décrit une double diffusion dans de la gélose, posée sur des lames. Le mouvement est également décrit comme linéaire ou radial. Les méthodes d'immunodiffusion sont utilisées pour l'analyse qualitative et quantitative des protéines sériques. Cependant, des méthodes plus sensibles et spécifiques telles que le dosage immunoabsorbant enzymatique (ELISA) et le dosage radioimmunologique (RIA) ont presque remplacé les méthodes d'immunodiffusion.

Immunodiffusion unique:

L'antigène ou l'anticorps reste fixé et l'autre réactif se déplace (technique de diffusion d'Oudin).

Double immunodiffusion:

Les antigènes et les anticorps sont libres de se rapprocher l'un de l'autre. (Technique d'Ouchterlony).

La gélose fondue est versée sur une lame de verre ou de petridish et laissée à se solidifier. Deux petits puits distants de quelques millimètres sont percés. L'antigène et les solutions d'anticorps correspondantes sont déposés dans des puits opposés. La lame / le petridish sont ensuite conservés dans une chambre humide pendant 18 à 24 heures. L'antigène et l'anticorps se déplacent dans la gélose et se combinent pour former un complexe antigène-anticorps. Le complexe antigène-anticorps est visible sous forme de ligne de précipitation.

La double diffusion est également réalisée en plaçant l'antigène et les puits d'anticorps sous différents angles à des fins de comparaison. Les trois modèles de ces réactions sont illustrés à la figure 27.2.

je. Réaction d'identité:

Les antigènes dans deux puits sont identiques (Agl et Ag2). Ainsi, la réaction avec l'anticorps donne des lignes de précipitation exactement similaires. Les lignes de précipitation ne se croisent pas mais forment une ligne continue. La fusion des deux lignes de précipitation indique que l'anticorps réagit avec les épitopes couramment présents sur les deux antigènes.

ii. Réaction de non-identité:

Deux antigènes non identiques (Agl et Ag3) se trouvent dans les puits d'antigène, tandis que le puits d'anticorps contient des anticorps dirigés contre les deux antigènes. Les deux lignes de précipitation antigène-anticorps formées diffèrent l'une de l'autre. Par conséquent, les deux lignes de précipitation se croisent complètement.

iii. Réaction d'identité partielle:

Les déterminants antigéniques dans les antigènes de deux puits sont partiellement partagés (Agl et Agla). Par conséquent, l'anticorps réagit à la fois avec les antigènes et forme des lignes qui ne forment pas un croisement complet. La ligne de précipitation ne se croise que dans un sens. La ligne de précipitation prolongée est appelée éperon. L'éperon indique que l'anticorps précipite également un épitope supplémentaire qui n'est pas présent dans l'un des antigènes.

La double immunodiffusion peut également être utilisée pour l'analyse semi-quantitative d'antigène ou d'anticorps (Fig. 27.3):

Fig. 27.3:

Double immunodiffusion pour l'analyse semi-quantitative de l'antigène. L'anticorps est placé dans le puits central et l'antigène est placé à différentes concentrations dans les puits périphériques

je. Quantification de l'antigène:

L'antigène X est dilué en série et placé dans les puits entourant un puits central dans lequel l'anticorps anti-X est placé. L'antigène et l'anticorps se diffusent hors des puits et réagissent l'un avec l'autre, entraînant la formation de lignes de précipitation entre les puits d'antigène et d'anticorps. La quantité de précipité antigène-anticorps diminue avec la diminution des quantités d'antigènes dans les différents puits. Par conséquent, l'épaisseur des lignes de précipitation diminue à mesure que les concentrations en antigène diminuent.

ii. Quantification de l'anticorps:

Une procédure similaire à la quantification de l'antigène est utilisée, sauf que la position de l'antigène et de l'anticorps est modifiée. L'antigène est placé dans le puits central et l'anticorps à différentes dilutions est placé dans les puits extérieurs.

Immunodiffusion radiale simple:

Mancini a introduit cette nouvelle technique de quantification précise des antigènes. L'anticorps est mélangé avec de la gélose fondue et versé dans une boîte de Pétri. Après la solidification de la gélose, les puits sont coupés et remplis avec différentes concentrations d'antigène (Fig. 27.4).

L'antigène diffuse hors du puits et forme le précipité complexe antigène-anticorps en 48 à 72 heures. Le précipité est vu comme une ligne circulaire blanche autour de chaque puits. Le diamètre de l'anneau circulaire est directement proportionnel à la concentration en antigène (c'est-à-dire que plus la concentration en antigène est importante, plus le diamètre du précipité est élevé).

Une courbe standard peut être tracée dans une feuille de graphique en traçant les concentrations en antigène connues en abscisse et les diamètres en ordonnée. L'antigène à tester, dont la concentration est inconnue, peut être déterminé en interpolant la courbe standard avec le diamètre du précipité formé par l'antigène à tester.

La sensibilité de cette méthode est de 1-3 µg / ml d’antigène. Cette méthode est utilisée pour quantifier les concentrations d'IgG, d'IgM ou d'IgA (en incorporant dans l'antisérum anti-IgG, anti-IgM ou anti-IgA, respectivement).