Notes utiles sur les tests d'activation des lymphocytes
Les capacités fonctionnelles des lymphocytes en réponse à des antigènes ou à des mitogènes sont déterminées par des tests d'activation des lymphocytes.
Par conséquent, les tests d'activation des lymphocytes sont plus appropriés pour évaluer l'immunocompétance de l'individu qu'une simple énumération de lymphocytes.
Il existe deux types de tests d'activation des lymphocytes:
je. Détection de «marqueurs d'activation» à la surface des lymphocytes.
ii. Evaluation de la capacité des lymphocytes à proliférer après stimulation par les lymphocytes T.
Les stimuli des cellules T les plus couramment utilisés pour évaluer la prolifération des lymphocytes T sont:
je. Les lectines [telles que la phytohémagglutinine (PHA) et la concanavaline A (ConA)
ii. Des toxines bactériennes qui agissent comme super antigènes
iii. Composés chimiques [tels que l'acétate de myristate de phorbal (PMA), les ionophores de calcium
iv. Cytokines
v. mAbs aux récepteurs de surface (en particulier les molécules CD3 sur les cellules T)
L'activation des cellules B est induite par:
je. Pokogen-mitogen (PWM). PWM active également les cellules T
ii. Super antigènes
iii. Lipopolysaccharides
iv. Acm qui réticulent les slgs sur la surface des cellules B.
une. Les lymphocytes purifiés sont cultivés dans des puits à microtitration à 96 puits et stimulés avec un antigène ou un mitogène (généralement pendant 48 heures).
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La thymidine tritiée ( 3 H-Tdr) est ajoutée aux puits et incubée
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Le contenu des puits est aspiré et filtré sur des filtres et la quantité de 3 H Tdr dans le papier filtre est mesurée. L'incorporation de 3 H-Tdr dans l'ADN chromosomique reflète la prolifération cellulaire.
b. Il existe des tests non radioactifs pour déterminer la prolifération des cellules. Ces tests utilisent des colorants fluorescents incorporant dans l'ADN ou des colorants mesurant la respiration oxydative tels que le MTT.
c. La bromodésoxyuridine (BrdU) est incorporée à l'ADN de cellules à réplication élevée et peut donc être utilisée pour évaluer la prolifération cellulaire. La BrdU incorporée dans les cellules est détectée en utilisant des AcM contre la BrdU et la cytométrie en flux (comme la détection d'antigènes intracellulaires par cytométrie en flux).
La BrdU peut également être administrée in vivo à des patients cancéreux, puis la tumeur peut être réséquée et les cellules tumorales peuvent être évaluées pour déterminer l'incorporation de BrdU. Cet essai donne une idée de la fraction proliférative de cellules tumorales chez un patient.
ré. L'activation des lymphocytes T cytotoxiques est dosée par un test de libération de 51Gr:
Les cellules cibles sont marquées avec du chrome radioactif ( 51 Cr), qui se lie aux protéines intracellulaires des cellules cibles.
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Les cellules cibles marquées sont incubées avec des cellules T cytotoxiques.
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La lyse des cellules cibles par les cellules T cytolytiques aboutit à la libération du 51 Cr.
Les cellules sont centrifugées et le 51 Cr libéré dans le surnageant est mesuré. La quantité de 51 Cr libéré est proportionnelle à la lyse des cellules.
