Test de réduction des nitrates sur bactéries afin de déterminer la capacité à réduire les nitrates

Lisez cet article pour en savoir plus sur les performances du test de réduction des nitrates sur des bactéries afin de déterminer leur capacité à réduire les nitrates!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de réduire les nitrates, car elles peuvent produire l'enzyme «nitrate réductase».

Cette enzyme, en présence d'un donneur d'électrons approprié, réduit les nitrates (N0 ₃ ^- ) en nitrites (N0 ₂ ^- ). La présence de N0 ₂ ^- est indiquée par l'acide sulfanilique et l'a-naphthylamine, qui changent de couleur en rouge.

Dans le test de réduction des nitrates, les bactéries à tester sont cultivées dans un bouillon contenant du nitrate (N0 ₃ ^- ). Si la bactérie a la capacité de réduire les nitrates, le bouillon acquiert une couleur rouge lors de l'ajout d'acide sulfanilique et d'a-naphthylamine.

Si aucune couleur rouge n’est produite, cela signifie que la bactérie ne réduit pas du tout la N0 ₃ ^- ou bien qu'elle produit un enzyme très puissant, la nitrate réductase, qui réduit rapidement la N0 ₃ ^- au ^- delà de N0 ₂ ^- en NH ₃ et N ₂ . Pour confirmer cela, une petite quantité de poussière de zinc est ajoutée, ce qui réduit le NO ₃ ^-, si disponible dans le support, en N0 ₂ ^-, produisant ainsi une couleur rouge.

Ainsi, si une couleur rouge est produite, cela indique que N0 ₃ ^- est présent dans le milieu sous forme inchangée et que la bactérie n’a pas la capacité de réduire les nitrates. Si la couleur rouge n'est pas produite, cela signifie que le N0 ₃ ^- a été réduit au-delà de N0 ₂ ^- en NH ₃ et N ₂ et que la bactérie a la capacité de réduire les nitrates.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, bouchons en coton, boucle d’inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal à incandescence, incubateur, bouillon de nitrate, poussière de zinc, solution de réactif nitrate A, solution de réactif nitrate B, colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du bouillon de nitrate (contenant principalement du nitrate) ou sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 100 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml par agitation et tourbillonnement ( Figure 7.10).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 2 en utilisant HCl 0, 1 N s'il est supérieur ou en utilisant NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon est réparti dans cinq tubes à essai (environ 10 ml chacun) bouchés avec du coton, recouverts de papier kraft et noués avec du fil ou une bande de caoutchouc.

4. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

5. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

6. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

7. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C pendant 48 heures dans un incubateur.

8. On ajoute dans chaque tube à essai 0, 5 ml de solution de réactif nitrate A (contenant de l'acide sulfanilique) et de solution de réactif nitrate B (contenant de l'a-naphthylamine), on agite bien et on observe un changement de couleur au bout de 15 minutes.