Différents produits chimiques et supports utilisés dans un laboratoire de microbiologie

Différents produits chimiques et supports utilisés dans un laboratoire de microbiologie!

En laboratoire, les bactéries sont cultivées sur des substances riches en nutriments appelées «médias». Une variété de supports sont également requis pour des utilisations spécifiques.

Les composants du milieu sont pesés dans une proportion donnée, mélangés dans la quantité d'eau requise et stérilisés à l'autoclave. La bactérie y est inoculée et laissée se développer.

Peser les ingrédients des médias est un travail fastidieux et certains ingrédients peuvent être manqués sans le savoir. Pour surmonter cette difficulté, des supports prêts à l'emploi sous forme de poudre sont disponibles aujourd'hui.

Ces milieux contiennent tous les ingrédients dans les proportions prescrites. À une quantité définie du milieu en poudre (comme indiqué sur l'étiquette de l'emballage), une quantité d'eau spécifiée est ajoutée et stérilisée.

Les milieux de culture sont des types suivants:

I. Milieu défini chimiquement:

Les milieux définis chimiquement ou synthétiques sont les milieux dans lesquels tous les produits chimiques spécifiques (molécules et atomes) et leurs concentrations peuvent être déterminés. Les produits chimiques peuvent inclure H20, NaCl, Na2S04, KCl et agar. Exemples: bouillon de synthèse inorganique, bouillon de sel de glucose.

II. Média complexe:

Les milieux complexes sont les milieux dans lesquels tous les produits chimiques spécifiques (molécules et atomes) et leurs concentrations ne peuvent être déterminés. Pour les bactéries fastidieuses, peu de substances complexes, telles que l'extrait de boeuf, l'extrait de levure et la peptone, sont utilisées dans les milieux, dont la composition chimique exacte (molécules et atomes) varie considérablement et n'est pas connue. Ces milieux sont principalement utilisés pour la croissance profuse de bactéries. Exemples: bouillon nutritif et gélose nutritive.

III. Médias spécialisés:

Ces milieux sont utilisés à des fins spécifiques, plutôt que seulement pour la croissance de bactéries.

En fonction de leur utilisation, ils sont des types suivants:

1. Média sélectif:

Ce sont les médias contenant une composition spécifique d’ingrédients qui favorisent la croissance de certaines bactéries cibles et inhibent la croissance des autres. Ils sont utilisés pour isoler des groupes spécifiques de bactéries.

Lorsqu'un groupe particulier de bactéries se développe dans un milieu sélectif, il présente les caractéristiques typiques des colonies, qui facilitent sa détection et son dénombrement dans divers échantillons. Les bactéries particulières d'intérêt, trouvées sous forme de colonies isolées, sont prélevées pour des tests supplémentaires d'identification confirmée. Parfois, les supports sélectifs sont également utilisés comme supports différentiels.

Les exemples de supports sélectifs sont donnés ci-dessous:

(a) gélose MacConkey:

Il est utilisé pour cultiver des espèces de bactéries à Gram négatif. Le cristal violet utilisé dans le milieu inhibe la croissance des bactéries à Gram positif, tout en permettant aux espèces à Gram négatif de se développer.

b) gélose EMB:

L'agar au bleu de méthylène et à l'éosine (gélose EMB) est utilisé pour cultiver des espèces de bactéries à gram négatif. Il inhibe partiellement la croissance des bactéries à Gram positif, ce qui permet à l’espèce de bactéries à Gram négatif de s’y développer plus abondamment. Il est également utilisé dans l'identification de la forme entérique du coli, Escherichia coli, qui se développe en colonies bleu-noir à reflets verts métallisés.

D'autres coliformes entériques, tels que Enterobacter aerogenes, se développent en colonies épaisses, mucoïdes et roses. Outre ces fomenteurs de lactose, des non-fomenteurs de lactose s'y développent également, mais en tant que colonies incolores, pour lesquelles ils prennent la couleur pourpre du milieu.

c) Gélose au sel de mannitol:

Il est utilisé pour faire pousser Staphylococcus spp. La forte concentration en sel (7, 5% NaCl) présente dans le milieu inhibe la croissance de la plupart des autres bactéries. Il différencie également le staphylocoque en un staphylocoque à fermentation du mannitol, qui se développe avec des zones jaunes entourant les colonies et un staphylocoque à fermentation du mannitol, qui se développe sans changement de coloration.

2. Médias différentiels:

Ce sont les milieux sur lesquels différentes bactéries se développent sous forme de colonies, avec des caractéristiques visuelles différentes.

Les exemples de supports différentiels sont donnés ci-dessous:

(a) gélose MacConkey:

Sur ce milieu, les bactéries intestinales normales non pathogènes, qui sont des fermenteurs de lactose, se développent en colonies rouges, tandis que les bactéries intestinales pathogènes, qui ne fermentent pas le lactose, se développent en colonies incolores.

b) gélose au sang:

Le sang est le constituant important de ce milieu. C'est un ingrédient d'enrichissement pour les bactéries fastidieuses telles que Streptococcus spp.

Il est utilisé pour différencier les propriétés des streptocoques afin de produire différents types d'hémolyse du sang, comme suit:

(i) hémolyse α:

Ici, une destruction partielle des globules rouges se produit, entraînant des zones de couleur verte autour des colonies en raison de la réduction de l'hémoglobine en méthémoglobine.

(ii) β-hémolyse:

Ici, l'hémolyse complète des globules rouges se produit, entraînant une zone claire autour des colonies. Cette hémolyse est provoquée par deux types d'hémolysines, à savoir la "streptolysine O", qui est une enzyme antigénique labile à l'oxygène et la "streptolysine S", qui est une lysine non antigénique stable à l'oxygène.

(iii) y-hémolyse:

Ici, aucune hémolyse ne se produit, ce qui ne crée aucune zone autour des colonies.

3. Média de transport:

Ils sont le support utilisé pour le transport rapide de bactéries, durant lesquelles la croissance est indésirable. Ces supports ne contiennent que du tampon et du sel. Les milieux ne contiennent aucune source de C, N et d’autres facteurs de croissance. Il empêche la croissance microbienne.

4. Milieu d'enrichissement:

Ce sont les milieux dans lesquels la proportion relative de la bactérie cible est enrichie, car ils contiennent les nutriments pour la bactérie cible, alors qu’il n’en est aucun pour les autres. Par exemple, les matières fécales contiennent un très faible nombre de Salmonella et de Shigella.

Pour les isoler, ils sont d'abord cultivés dans un bouillon de sélénite ou un bouillon GN (gram négatif), dans lequel seuls Salmonella et Shigella vont se développer à profusion, tandis que d'autres ne grandiront pas et resteront en phase de latence. Celles-ci sont ensuite striées sur un support solide pour obtenir des colonies de Salmonella et de Shigella.

5. Médias enrichis:

Ils sont le support utilisé pour soutenir la croissance d'un maximum de types de bactéries.

6. Médias biochimiques:

Ces milieux sont utilisés pour tester les activités biochimiques des bactéries, ce qui facilite leur identification. Une liste des principaux milieux biochimiques utilisés dans les tests biochimiques réalisés pour l'identification de différentes bactéries est donnée ci-dessous.