7 techniques pour l'observation d'objets sous microscopes électroniques
Certaines des techniques les plus importantes qui sont adoptées pour l'observation d'objets au microscope électronique sont les suivantes: (1) Coulée à l'ombre (2) Coloration négative (3) Sectionnement ultra-mince (4) Gravure à froid (5) Localisation des constituants cellulaires (6) Localisation des enzymes (7) Autoradiographie.
(1) projection d'ombres:
En cas de projection dans l’ombre, l’objet microscopique est séché dans une grille spéciale placée dans un bocal à vide.
Une couche extrêmement mince de métal (par exemple, du platine) est déposée sur l’objet à partir d’un filament fortement chauffé selon un angle oblique, de sorte que l’objet produise une ombre sur le côté non revêtu.
L'examen de l'image ombrée fournit des informations sur la forme de l'objet (caractéristiques topographiques de la surface de l'objet), qui peuvent être observées au microscope électronique à balayage.
(2) coloration négative:
Cette technique est suivie pour observer des détails minutieux de très petits objets, tels que les virus et les bactéries flagelles. Un matériau opaque aux électrons, comme l'acide phosphotungstique ou son sel, est autorisé à former une couche de dépôt épais à la surface de l'objet, sans y pénétrer. Lorsque les électrons du canon à électrons du microscope électronique ne peuvent pas traverser ces surfaces revêtues, ces structures deviennent clairement visibles.
(3) section ultra-mince:
Une cellule microbienne intacte est trop épaisse pour permettre la visualisation de ses fines structures internes au microscope électronique. Pour l'observation des structures fines intracellulaires, la cellule est encastrée dans un bloc de matière plastique et découpée en sections ultra-minces (jusqu'à 60 nm).
La structure exacte est interprétée en observant plusieurs tranches ultra-minces coupées à différents niveaux et sous différents angles. L'amélioration du contraste des structures est possible grâce à l'utilisation de colorants spéciaux, tels que les sels d'uranium et de lanthane.
(4) gravure à froid:
Pour obtenir des coupes ultrafines d'un objet, il faut le fixer par des traitements chimiques. De tels traitements chimiques produisent des artefacts. Ces artefacts sont surmontés par la gravure au froid. En gravure gelée, l’éprouvette est congelée à l’intérieur d’un bloc et est sectionnée, alors qu’elle est toujours confinée à l’intérieur du bloc.
(5) Localisation des constituants de la cellule:
C'est une technique spéciale réalisée pour localiser les constituants chimiques des cellules. Par exemple, pour localiser un antigène dans une cellule, une section ultra-mince de la cellule est traitée avec un anticorps marqué à la ferritine, qui se lie à l'antigène pour former un complexe anticorps-antigène marqué à la ferritine.
La ferritine étant une substance de haute densité contenant du fer, le complexe anticorps-antigène affecte nettement le passage d'un faisceau d'électrons, produisant ainsi un contraste élevé pour une observation claire au microscope électronique.
(6) localisation des enzymes:
Cette technique est utilisée pour localiser la position des enzymes dans les cellules. Par exemple, lors de la détection de l'enzyme isocitrate déshydrogénase, des sections ultra-minces de cellules bactériennes sont préparées. Ensuite, de l'or colloïdal est spécifiquement apposé sur l'enzyme, selon une technique immunochimique. L'enzyme colloïdale fixée à l'or peut être observée au microscope électronique.
7) autoradiographie:
Il s'agit d'une technique cytochimique dans laquelle la localisation d'un constituant chimique particulier dans un objet est déterminée en observant le site, sur lequel une matière radioactive devient positionnée. L'objet est d'abord exposé à la substance radioactive pour permettre son absorption.
Ensuite, il est recouvert d'une couche d'émulsion photographique et maintenu dans l'obscurité pendant quelques heures. Le rayonnement ionisant émis lors de la désintégration de la substance produit des images latentes dans l'émulsion. Après traitement photographique, les images développées sont visualisées au microscope électronique sous forme de grains d’argent dans la préparation.
