Comment effectuer la coloration capsulaire d'une bactérie

Vise à effectuer la coloration des bactéries dans la capsule, pour observer la capsule bactérienne.

Objectif:

Chez certaines bactéries, la paroi cellulaire est entourée d’une enveloppe cellulaire visqueuse appelée «capsule». Il est composé de polysaccharide, de glycoprotéine ou de polypeptide.

Lorsque la capsule est trop fine pour être observée au microscope optique, on l'appelle «microcapsule» et lorsqu'elle est si épaisse que de nombreuses cellules sont noyées dans la matrice capsulaire; ça s'appelle 'slime'.

Sur la base de la présence ou de l’absence de capsule, les bactéries sont de deux types:

(1) Bactéries Capsulées:

Une bactérie qui possède une capsule est une bactérie encapsulée.

(2) Bactéries non encapsulées:

Une bactérie qui ne possède pas de capsule est une bactérie non encapsulée

Le but de la coloration des capsules est d’observer la capsule bactérienne en distinguant le matériel capsulaire de la cellule bactérienne.

Principe:

Dans la coloration en capsule, un frottis de bactérie est effectué au centre d'une lame. Il n'est pas fixé à la chaleur, car le retrait de la cellule provoqué par le chauffage peut créer une zone claire autour de la cellule, ce qui peut être confondu avec la capsule.

De plus, le matériau capsulaire étant soluble dans l'eau et pouvant être lavé avec un lavage vigoureux, seuls deux réactifs sont utilisés pour la coloration sans aucun lavage intermédiaire. L'un des deux réactifs est la tache primaire, le violet cristallisé. Il confère une couleur bleu-violet foncé à la fois à la cellule et à la capsule.

Cependant, il est "absorbé" dans la cellule en raison de la nature ionique des composants cellulaires, alors qu'il "adhère" simplement à la capsule, en raison de la nature non ionique du matériau capsulaire. Pour éviter de déloger le matériel capsulaire, le frottis n'est pas lavé à l'eau.

Le deuxième réactif, le sulfate de cuivre, agit à la fois comme agent décolorant et contre-colorant. Il se décolore en éliminant le cristal violet en excès autour des cellules ainsi que le cristal violet adhérant à la capsule. Il colore également la capsule et lui donne une couleur bleu clair. La capsule apparaît maintenant en bleu clair, alors que la cellule apparaît en violet foncé.

Matériaux nécessaires:

Diapositive, boucle, huile d'immersion, microscope, coloration au violet cristal, solution de sulfate de cuivre (20%).

Procédure:

1. La lame est nettoyée correctement sous l'eau du robinet, de sorte que l'eau ne reste pas sous forme de gouttes sur sa surface (Figure 5.14).

2. L'eau adhérente est essuyée avec du papier absorbant et la lame est séchée à l'air.

3. Un frottis de bactérie est préparé au centre de la lame selon les deux méthodes suivantes.

(une) Si des bactéries se développant sur une plaque d'agar ou une inclinaison d'agar doivent être observées, une goutte d'eau est placée au centre de la lame et une boucle de bactéries provenant de la plaque ou d'une inclinaison y est transférée par une boucle stérilisée sur flamme. Ensuite, par une rotation lente de la boucle dans la goutte, une suspension bactérienne est préparée et elle se répand jusqu'à l'obtention d'un frottis.

(b) Si des bactéries développées dans un bouillon liquide doivent être observées, une goutte de la suspension de bactéries est directement placée au centre de la lame par une boucle stérilisée à la flamme et un frottis est réalisé par étalement.

4. Le frottis est séché à l'air. Aucune fixation à la chaleur n'est effectuée car le retrait cellulaire résultant peut créer une zone claire autour des bactéries, ce qui peut être confondu avec une capsule.

5. Le frottis est inondé avec la coloration primaire, le violet violet, pendant 5 à 7 minutes.

6. Le frottis est lavé avec une solution à 20% de sulfate de cuivre. Pour éviter de déloger le matériel capsulaire, le frottis n'est pas lavé à l'eau.

7. La lame est essuyée avec du papier absorbant.

8. La lame est fixée sur la platine du microscope et le frottis est observé sous des objectifs de faible puissance et de forte sécheresse.

9. Une goutte d'huile d'immersion est appliquée sur le frottis.

10. Le frottis est observé sous l'objectif d'immersion dans l'huile.