Principe de fonctionnement du microscope à fluorescence (avec figure)

Lisez cet article pour en savoir plus sur le fonctionnement du microscope à fluorescence!

Principe de fonctionnement:

De nombreuses substances absorbent la lumière. Cependant, certains d'entre eux, après avoir absorbé la lumière d'une longueur d'onde et d'une énergie particulières, émettent de la lumière d'une longueur d'onde plus longue et d'une énergie moindre.

De telles substances sont appelées «substances fluorescentes».

L'application de ce phénomène est la base du microscope à fluorescence. En pratique, les microbes sont colorés avec un colorant fluorescent, puis éclairés à la lumière bleue. Le colorant absorbe la lumière bleue (longueur d'onde plus courte) et émet de la lumière verte (longueur d'onde plus grande).

Dans un microscope à fluorescence, une lampe à arc au mercure à haute intensité est utilisée comme source de lumière (figure 4.11). Il émet une lumière blanche qui passe à travers un "filtre excitateur". Il ne laisse passer que la composante bleue de la lumière blanche (la lumière blanche est composée de sept couleurs qui sont, par ordre décroissant de longueur d'onde, le violet, l'indigo, le bleu, le vert, le jaune, l'orange et le rouge) et la bloque composants de couleur.

Un miroir dichroïque, qui reflète la lumière bleue, mais permet une lumière verte, est utilisé sur le trajet de la lumière bleue. Le miroir est fixé à un angle tel que la lumière bleue est réfléchie vers le bas de l'échantillon.

Le spécimen est préalablement coloré avec un colorant fluorescent, tel que l'acridine orange NO, le jaune acridine, l'acriflavine, la thioflavine S, la thioflavine T ou le jaune titan G. Certaines parties du spécimen conservent le colorant, d'autres pas. Les parties qui retiennent le colorant fluorescent absorbent la lumière bleue et émettent de la lumière verte. La lumière verte émise monte et traverse le miroir dichroïque. Il réfléchit la lumière bleue, le cas échéant, et ne laisse passer que la lumière verte.

Ensuite, la lumière atteint un «filtre barrière». Il laisse passer la lumière verte dans les yeux et bloque toute lumière bleue résiduelle provenant du spécimen, qui pourrait ne pas avoir été complètement réfléchie par le miroir dichroïque.

Ainsi, l'œil perçoit les parties tachées du spécimen comme un objet vert brillant sur un fond noir de jais, alors que les parties non tachées du spécimen restent invisibles.