2 méthodes de techniques d'électroimmunodiffusion pour l'antigène et l'anticorps
Dans les techniques d'immunodiffusion, on laisse les antigènes et les anticorps se diffuser pour former une ligne de précipitation, ce qui prend plus de temps (24 à 72 heures).
Si le mouvement de l'antigène et / ou de l'anticorps est accéléré, la ligne de précipitation se formera dans un délai très court, ce qui permettra d'établir rapidement le diagnostic. Cet objectif est atteint en déplaçant électriquement l'antigène et l'anticorps. Il existe de nombreuses variantes de ce principe. Les deux méthodes couramment utilisées sont l'immunoélectrophorèse à contre-courant et l'électrophorèse de Laurell.
Immunoélectrophorèse à contre-courant (double électroimmunodiffusion unidimensionnelle):
Deux puits sont coupés dans la gélose sur une lame.
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Un puits est rempli d'antigène et l'autre est rempli d'anticorps.
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Le côté anticorps de la gélose est connecté à l'anode et le côté antigène est connecté à la cathode de l'appareil d'électrophorèse.
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Lors de l'application de l'électricité, les molécules d'antigène et d'anticorps se déplacent (du fait de leurs charges électriques) dans la gélose sous l'influence de l'électricité.
Dans un tampon alcalin, la plupart des antigènes cliniquement importants sont électronégatifs et se déplacent donc vers l'anode (c'est-à-dire vers le puits d'anticorps). Les molécules d'anticorps sont électriquement neutres ou faiblement négatives. Normalement, les molécules d'anticorps électriquement négatives devraient se déplacer vers l'anode.
Mais le mouvement des ions hydroneum dans la gélose pendant l'électrophorèse est très fort et tire les molécules d'anticorps faiblement négatives vers la cathode (c'est-à-dire vers le puits de l'antigène). Comme les molécules d'antigène et d'anticorps se déplacent dans des directions opposées, elles se rencontrent et forment une ligne de précipitation entre les deux puits. La ligne de précipitation est visible en 30 minutes (au lieu de 24 heures en diffusion) et est environ 10 fois plus sensible que la diffusion.
L’immunoélectrophorèse à contre-courant est utilisée pour détecter
une. Antigènes méningococciques, cryptococaux et hémophiles dans le liquide céphalorachidien et
b. Antigène de surface de l'hépatite B dans le sérum.
Électrophorèse de roquette de Lauren (électroimmunodiffusion simple à une dimension):
Cette technique est utilisée pour quantifier les antigènes. L'anticorps est mélangé avec de la gélose fondue et versé sur une lame de verre. Après la solidification, les puits sont coupés et remplis avec différentes concentrations d'antigène.
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Lorsque l'électricité est appliquée, l'antigène est entraîné dans la gélose contenant des anticorps. Des lignes de précipitation sont formées le long des marges latérales de la limite mobile de l'antigène. Progressivement, l'antigène est perdu par précipitation, de sorte que sa concentration au bord d'attaque diminue et que les marges latérales convergent pour former une pointe nette. Ainsi, le modèle de précipitation résultant ressemble à une pointe ou à une fusée.
La distance de la pointe de l'antigène augmente avec l'augmentation de la concentration en antigène. Une courbe standard peut être établie en utilisant des concentrations connues d'antigènes. La concentration d'un antigène à tester peut être déterminée par interpolation de la courbe standard avec la distance de la fusée formée.
La sensibilité de cette technique est d'environ 0, 5 mg / ml. La technique de Laurell est également utilisée pour détecter les antigènes de cryptocoque, méningocoque et hémophilus dans le liquide céphalorachidien (LCR).
