Techniques de dosage immunohistochimique pour détecter les antigènes tumoraux
Les dosages immunohistochimiques sont largement utilisés pour détecter les antigènes tumoraux et classifier les types de cellules lymphocytaires dans les sections de pathologie chirurgicale.
Le spécimen de tissu est fixé sur une lame de verre.
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Un mAb marqué par une enzyme (conjugué) est appliqué sur l'échantillon et incubé.
je. Si l'échantillon possède un antigène spécifique contre l'AcM, le conjugué se lie à l'antigène présent sur l'échantillon.
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Après lavage, le substrat est ajouté et incubé.
je. Le développement de la couleur indique qu'un antigène spécifique contre le mAb est présent dans la coupe tissulaire.
ii. En l'absence d'antigène spécifique, il n'y a pas de développement de couleur.
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La lame est lavée et la coupe de tissu est vue au microscope pour la présence de couleur.
La peroxydase de raifort (HRP) est l’enzyme communément utilisée dans les techniques immunohistochimiques. Le substrat de HRP est le peroxyde d'hydrogène et la diamino-benzidine. La réaction de la HRP avec la diaminobenzidine produit une couleur noire.
La peroxydase-antiperoxydase (PAP) est une autre méthode utilisée en pathologie chirurgicale pour détecter les enzymes et les antigènes liés aux tumeurs.
C'est une méthode en trois étapes:
Étape 1:
Le tissu suspecté d'avoir un antigène particulier est fixé sur une lame de verre.
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L'anticorps de lapin connu contre l'antigène en question est déposé sur le tissu (suspecté de posséder l'antigène) fixé sur une lame de verre.
je. Si l'antigène correspondant se trouve dans le tissu, l'anticorps se lie à celui-ci. La lame est lavée après incubation.
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Étape 2:
L'immunoglobuline anti-lapin (appelée anticorps de liaison) tombe sur la lame.
je. Si le premier anticorps de lapin se trouve sur la lame (lié à l'antigène), l'immunoglobuline anti-lapin se lie à l'anticorps de lapin. Après incubation, la lame est lavée.
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Etape 3:
Un complexe immunitaire, composé d'anticorps de lapin anti-peroxydase, associés à la peroxydase, est éliminé. Cet anticorps de lapin se liera à l'immunoglobine anti-lapin (link anticorps-step 2) via sa région Fc. Après incubation, la lame est lavée.
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Enfin, un substrat de peroxydase est ajouté. Le substrat réagira avec la peroxydase, ce qui entraînera la formation d'un produit coloré visible au microscope.
je. La présence du produit coloré sur le tissu indique la présence de l'antigène correspondant.
ii. L'absence de produit coloré sur la lame indique que l'antigène en question est absent des tissus.
