3 Classifications des techniques d'agglutination
Les techniques d'agglutination des cellules sont classées en trois types: 1. agglutination directe, 2. agglutination indirecte (passive) et 3. agglutination inverse (passive).
1. Test d’agglutination directe:
Les cellules (telles que les bactéries, les champignons et les érythrocytes) et les antigènes particulaires insolubles peuvent être directement agglutinés par leurs anticorps spécifiques. L'anticorps possède deux bras Fab avec lesquels il peut se lier aux antigènes de deux cellules. De même, de nombreuses molécules d'anticorps se lient à un certain nombre de cellules pour former un réseau.
Cette formation de réseau est vue visuellement sous forme de touffes. Par conséquent, la formation de grumeaux indique la présence d'une liaison antigène-anticorps. L'absence d'agglutination indique l'absence de réaction antigène-anticorps.
Utilisations du test d'agglutination directe:
une. Identification des microbes:
Les colonies bactériennes cultivées dans des milieux de culture sont identifiées en utilisant des antisérums connus contre les microbes. L'antisérum antimicrobien qui produit une agglutination visible identifie la bactérie.
b. Diagnostic des infections microbiennes par détection de la présence d'anticorps anti-microbes dans le sérum. Les antigènes microbiens connus sont mélangés au sérum du patient et la survenue d'une agglutination indique la présence d'anticorps sériques dirigés contre le microbe.
c. Groupe sanguin ABO d'érythrocytes humains (en utilisant des antisérums).
Les tests d'agglutination sont effectués soit sur la lame (test d'agglutination sur lame), soit en tubes (test d'agglutination en tube).
je. Le test d'agglutination sur lame est simple et facile à réaliser et il ne prend que quelques minutes pour le réaliser.
ii. Le test d’agglutination sur tube est utilisé pour quantifier la quantité d’anticorps sériques dirigés contre un microbe en diluant le sérum en série, puis en mélangeant les sérums dilués à une quantité constante d’antigènes microbiens. Après une incubation appropriée, le titre du sérum est pris comme dilution maximale du sérum présentant une agglutination visible (par exemple, test en tube de Widal, test en tube de Brucella). Le titre reflète la concentration d'anticorps dans le sérum; plus le titre est élevé, plus la concentration en anticorps est élevée.
Les tests sur lame pour détecter les anticorps sériques contre les agents infectieux sont utilisés comme tests de dépistage initiaux. Les sérums des tests de lame positifs doivent être testés de nouveau par des tests sur tubes pour confirmer les résultats du test de lame. Le test sur lame peut donner des résultats trompeurs, en particulier avec des taux très élevés d’anticorps sériques (par exemple, un phénomène de prozone avec des anticorps anti-brucella).
Il existe une grande variabilité intrinsèque dans les systèmes d’essais d’agglutination. Par conséquent, lorsque les valeurs sériques du titre d'un patient sont vérifiées à deux reprises, la différence entre les valeurs du titre est significative, uniquement lorsque les valeurs du titre diffèrent d'au moins deux doubles dilutions [ou la différence de deux tubes (quatre fois la première valeur) ] (p. ex. dans l’essai en tube de Widal, le sérum est dilué en deux fois: 1 sur 20, 1 sur 40, 80, 1 sur 160, 1 sur 320 et 1 sur 640. Si un patient subit un premier test de Widal titre de 1 sur 160, le deuxième titre de test de Widal est significatif s’il est égal à 1 sur 640 ou supérieur à 1 sur 640).
Test d'anticorps hétérophiles:
Le test des anticorps hétérophiles est un test d'hémagglutination permettant de détecter les anticorps dirigés contre le virus d'Epstein Barr (EB), responsables de la mononucléose infectieuse. Les anticorps IgM formés au cours de la mononucléose infectieuse réagissent de manière croisée avec les antigènes de surface des globules rouges équins (probablement en raison de la similarité antigénique entre le virus EB et les protéines de surface des globules rouges équins) et provoquent une hémaglutination.
Test d’agglutination indirecte (passive):
Dans l’essai d’agglutination indirecte, des antigènes solubles connus sont appliqués sur d’autres cellules (par exemple des érythrocytes de mouton ou de dinde) ou des particules inertes (par exemple, le latex, la bentonite, le charbon, le polystyrène), qui servent de supports passifs aux antigènes.
De nombreux antigènes peuvent être enrobés sur les érythrocytes directement ou après traitement des érythrocytes avec du formol, de l'acide tannique ou du glutaraldélyde. L'utilisation des érythrocytes pour le revêtement présente les avantages suivants: facilité de disponibilité et de stockage. De plus, ces tests sont très sensibles.
Le sérum à tester est mélangé avec des érythrocytes ou du latex connus, revêtus d'antigène.
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Si le sérum à tester contient des anticorps, les érythrocytes ou les particules de latex s'agglutinent et produisent des grumeaux visibles.
Test d'hémagglutination:
Les tests d'hémagglutination sont simples et faciles à réaliser. Les tests qualitatifs et quantitatifs peuvent être effectués avec la technique d'hémagglutination.
Le sérum à tester est dilué en série dans une solution de diluant dans des puits de plaques de microtitration.
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Les globules rouges recouverts d'un antigène connu sont ajoutés en volumes égaux à tous les puits. Un contrôle positif approprié, un contrôle négatif et des contrôles de réactif sont utilisés. La plaque est bien agitée et incubée dans un endroit exempt de vibrations.
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Après l'incubation, la plaque est lue à l'œil nu pour agglutination.
Réaction positive:
Les puits avec agglutination indiquent la liaison des globules rouges revêtus d'antigène avec les anticorps correspondants dans le sérum à tester. Le fond du puits agglutiné est décrit comme ayant un aspect de tapis.
Réaction négative:
Dans les puits où il n'y a pas de liaison antigène-anticorps, l'agglutination des globules rouges ne se produit pas. En raison de la gravitation, les globules rouges s’installent au fond des puits et donnent l’apparence d’un «bouton», le bord du «bouton» étant net et régulier.
Titre en anticorps du sérum à tester:
La dilution de sérum donnant une agglutination à 50% par rapport au puits présentant une agglutination complète (à 100%) correspond au titre en anticorps du sérum à tester. Des kits d'hémagglutination sont disponibles pour la détection d'anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite B, le VIH, la thyroglobuline, etc.
Agglutination de particules de gélatine:
Les particules de gélatine sont une alternative aux érythrocytes pour les tests d'agglutination de particules. Les particules de gélatine spéciales (environ 3 µm de diamètre) ont une surface très hydrophile et il n’ya donc pas de liaison non spécifique des matériaux présents dans l’échantillon. Les particules de gélatine sont obtenues par séparation de phase et réticulation en trois dimensions à 40 ° C. Les particules résultantes sont fixées avec du formaldéhyde ou du glutéraldéhyde.
Les particules de gélatine n'ont aucune antigénicité et ne présentent donc pas les problèmes associés aux tests d'hémaglutination (tels que les anticorps hétérophiles, qui peuvent réagir de manière non spécifique avec les globules rouges et donner des agglutinations faussement positives dans les tests d'hémagglutination).
Test d'agglutination au latex:
Hormis les érythrocytes et la gélatine, quelques autres particules peuvent également être utilisées pour transporter des antigènes à leur surface. De telles particules revêtues d'antigène s'agglutineront lorsqu'elles seront mélangées à des anticorps spécifiques. Les antigènes protéiques et polysaccharidiques peuvent être appliqués sur les particules de latex. Ces particules revêtues d'antigène s'agglutineront en présence d'anticorps.
Test d'hémagglutination passive inverse:
Dans les tests d'hémagglutination passive inverse, les globules rouges sont recouverts d'anticorps connus. Ces kits sont utilisés pour détecter les antigènes dans les échantillons à tester, tels que HB s Ag dans le sérum.
Test Rose-Waaller:
Il s'agit d'un test d'hémagglutination passif permettant de détecter le facteur rhumatoïde. L'une des caractéristiques du facteur rhumatoïde humain est qu'il peut se lier à la fois aux IgG humaines et aux IgG de lapin. Les érythrocytes de mouton sont recouverts de quantités sous-agglutinantes d'anticorps IgG anti-mouton (élevés chez le lapin). Les facteurs rhumatoïdes agglutinent les érythrocytes de mouton revêtus d'IgG anti-mouton de lapin.
Test de floculation:
La floculation est un autre type d’essai de formation de complexe antigène-anticorps, utilisé pour détecter et quantifier les anticorps. Contrairement à l'agglutination et à la précipitation (où les complexes antigène-anticorps se déposent au fond du tube), lors du test de floculation, les complexes antigène-anticorps s'agrègent et restent en suspension sous forme de flocons. Les résultats sont lus au microscope. Cette technique est utilisée dans le test VDRL (test de laboratoire de recherche sur les maladies vénériennes) pour détecter les anticorps dirigés contre Treponema pallidum, la bactérie qui cause la syphilis.
Hémagglutination virale:
L'hémagglutination virale est une catégorie particulière d'agglutination des érythrocytes, qui ne comporte pas de réaction antigène-anticorps. Certains virus se lient aux protéines de surface des globules rouges et cette liaison entraîne une agglutination spontanée des globules rouges.
L'agglutination spontanée des globules rouges par un virus peut être prévenue par des anticorps anti-viraux spécifiques. Les anticorps dirigés contre le virus se lient aux antigènes de surface viraux et empêchent l’interaction des virus et des globules rouges et, par conséquent, les globules rouges ne sont pas agglutinés. Il s’appelle le test d’inhibition de l’hémagglutination virale et est utilisé pour quantifier les anticorps viraux dans le sérum des patients.
Test pour les agglutinines froides:
Les anticorps formés lors de certaines infections (notamment Mycoplasma pneumoniae) et les maladies auto-immunes ont une capacité particulière à agglutiner les globules rouges à 4 ° C. Ces anticorps s'appellent des agglutinines froides.
Des dilutions en série du sérum du patient sont incubées avec 1% de globules rouges à 4 ° C pendant la nuit.
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Les tubes sont examinés pour la présence d'agglutination. Si une agglutination est présente, les tubes sont réincubés à 37 ° C.
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La désagglutination des globules rouges à 37 ° C indique que le sérum contient des agglutinines froides. Le dosage de l’agglutinine à froid permet de diagnostiquer une infection à Mycoplasma pneumoniae. 50 à 80% des patients infectés par Mycoplasma pneumoniae ont une agglutinine froide appartenant au type IgM.
