Compléments de dosage d'antigènes et d'anticorps

Complément des dosages d'antigènes et d'anticorps!

Des méthodes de détermination précise de chacun des composants du complément des trois voies d'activation du complément et de plusieurs enzymes et régulateurs du système du complément sont disponibles.

Cependant, bon nombre des analyses ne sont disponibles que dans les laboratoires de recherche.

Il existe deux types d'analyses du complément:

1. Des tests qui mesurent les protéines du complément en tant qu'antigènes.

2. Des tests qui mesurent l'activité fonctionnelle du complément.

Les tests qui mesurent les protéines du complément en tant qu'antigènes sont généralement simples à réaliser, peu coûteux, prennent moins de temps et peuvent être réalisés dans de nombreux laboratoires. Mais ces tests antigéniques ne fournissent aucune information sur les capacités fonctionnelles des composants du complément, car ils permettent de détecter à la fois les composants du complément fonctionnellement actifs et les produits de dégradation du complément.

je. En règle générale, les tests antigéniques ne sont pas aussi sensibles que les tests fonctionnels.

ii. Les tests antigéniques ne détectent pas de faibles niveaux de composants du complément dans certains fluides corporels.

iii. Les tests ELISA sont disponibles pour la mesure des produits de scission des composants du complément ou des complexes qui se forment lors de l'activation du complément.

iv. L'activation du complément par la voie classique peut être mesurée en suivant les taux de C4d et de C4 dans le sérum.

v. La mesure ELISA des complexes C1r-C1s-C1INH fournit une mesure de l'activation du complément via la voie classique.

vi. L'activation d'une voie alternative peut être mesurée par la méthode ELISA en évaluant les niveaux de complexes Bb ou C3bBbP en circulation.

vii. L'activation de la voie classique ou alternative peut être surveillée en mesurant les niveaux d'iC3b ou de la forme soluble du complexe d'attaque membranaire sC5b6789.

viii. Des kits ELISA sont disponibles pour mesurer les concentrations sériques ou plasmatiques d'anaphylotaxine C3a et C5a.

Manipulation des échantillons pour les tests de complément:

Une manipulation correcte des échantillons est essentielle pour les dosages fonctionnels du complément. Certains composants du complément sont très labiles.

je. Pour la plupart des analyses fonctionnelles, le sérum est préféré au plasma car les chélateurs du calcium (tels que l'EDTA, l'héparine) utilisés pour obtenir le plasma peuvent être anti-complémentaires.

ii. Pour les dosages fonctionnels, le sang doit coaguler à température ambiante pendant 30 à 60 minutes, puis sur de la glace pendant au moins une heure.

iii. Pour les tests de liaison au Clq, le sang doit coaguler pendant 2 heures à la température ambiante. Le caillot est entouré et centrifugé à une température de 0 à 4 ° C pendant cinq minutes. Si des anticorps cryoprécipitants sont suspectés, la formation de caillots et la centrifugation du sang doivent être effectuées à 37 ° C, car la fixation du complément peut survenir si le spécimen est refroidi.

iv. Les échantillons de sérum ou de plasma doivent être aliquotés en plusieurs petits volumes et conservés immédiatement entre 40 et -80 ° C.

v. Lorsque les sérums sont transférés, ils doivent être bien scellés et placés dans des récipients contenant de grandes quantités de neige carbonique.

Compléter les tests fonctionnels:

Les tampons utilisés dans les analyses fonctionnelles du complément sont critiques car des modifications de la molarité et des concentrations en ions métalliques peuvent affecter les valeurs de titre du complément. Test du CH ₅₀ pour la voie du complément classique: Le test fonctionnel le plus simple de la voie classique mesure le complément hémolytique total.

L'absence de l'un des composants du complément donne un titre de complément hémolytique total (CH ₅₀ ) égal à zéro. Les érythrocytes de mouton sont généralement utilisés comme cellules cibles pour mesurer le CH ₅₀ ou l'activité fonctionnelle de composants du complément isolés. Les globules rouges de mouton sont plus sensibles à la lyse médiée par les anticorps et le complément que les globules rouges d'autres espèces.

Test AH ₅₀ pour la voie alternative du complément:

Les érythrocytes de lapin sont utilisés pour mesurer l'AH ₅₀ . Les globules rouges de lapin sont sensibles à la lyse indépendante des anticorps médiée par le sérum humain.

je. Les tests CH ₅₀ et AH ₅₀ sont d’excellents dosages permettant d’exclure une déficience génétique des composants du complément.

ii. Une activité normale du CH ₅₀ avec des valeurs réduites en AH ₅₀ résulte de défauts dans la voie alternative du complément.

iii. Des carences dans les composants du complément terminal entraînent une perte des activités de CH ₅₀ et de AH ₅₀ .

iv. Une déficience homozygote d'un composant du complément annule totalement le dosage hémolytique.

Le degré d'hémolyse est influencé par de nombreux facteurs, tels que la concentration en érythrocytes, la fragilité (âge) des érythrocytes, la quantité d'anticorps utilisé pour la sensibilisation, la nature de l'anticorps (IgG ou IgM), la force ionique du système tampon, P ^H, temps de réaction, température et concentrations de calcium ²⁺ ou de magnésium ²⁺ . La valeur des unités CH50 dans le sérum humain est calculée de plusieurs manières, telle que l’équation de Von Krough.

Mesure du déficit fonctionnel de composants individuels du complément:

Lorsque les antécédents et les symptômes d'un patient suggèrent une possible carence en composant du complément, des titrages hémolytiques du composant individuel peuvent être nécessaires. Pour produire des lyses d'érythrocytes, la présence et l'activation de tous les composants du complément (C1-C9) sont nécessaires. Si l'un des composants est absent, l'hémolyse ne se produit pas. Des préparations pures de chaque composant du complément individuel sont nécessaires pour détecter l'absence d'un composant du complément particulier dans le sérum ou le plasma d'un patient.

Pour mesurer les composants individuels du complément, des composants partiellement purifiés sont nécessaires. Cependant, la mesure de C4 est une exception en raison de la disponibilité de sérum de cobaye déficient en C4 (C4D). Les sérums d'humains et de cobayes atteints de C2 et de lapins présentant un déficit en C6 sont disponibles dans peu de laboratoires.

Les dosages fonctionnels du composant individuel sont sensibles et fournissent des informations précises sur l'activité d'un composant du complément. Mais la plupart de ces tests sont limités aux laboratoires de recherche.

Mesure de chaque composant du complément par analyse d'antigène:

L'immunodiffusion radiale simple est la méthode la plus courante pour quantifier les composants du complément, tels que C3, C4 et le facteur B. Il convient de rappeler que tous les dosages fonctionnels du complément peuvent être inhibés par une action anti-complémentaire du sérum (pouvant résulter d'un antigène). anticorps complexes, héparine, agents chélateurs et immunoglobuline agrégée).

Test de fixation du complément:

Lorsqu'il y a interaction antigène-anticorps, les composants du complément sont activés et consommés. Par conséquent, la consommation de complément du test in vitro indique la présence d'une interaction antigène-anticorps. Ce principe est utilisé pour détecter et mesurer l'antigène ou les anticorps dans le test de fixation du complément.

Le test se fait en deux temps. Dans la première étape, une interaction antigène-anticorps se produit et le complément est consommé. Dans la deuxième étape, un système indicateur est utilisé pour détecter si le complément est consommé ou non dans la réaction de première étape.

je. Si le complément est consommé dans la première étape, cela signifie que la réaction antigène-anticorps s'est produite dans la première étape.

ii. Si le complément n'est pas consommé, cela signifie qu'il n'y a pas eu d'interaction antigène-anticorps au premier stade.

Détection d'anticorps par test de fixation du complément:

Première étape:

Des concentrations fixes d'antigène et de complément connus (généralement, le sérum de cobaye frais est utilisé comme source de complément) sont prises. Le sérum contenant (anticorps inconnus) est ajouté et incubé.

A. Antigène connu + complément + sérum (anticorps correspondants présents). Le complément est consommé lors de l'incubation.

B. Antigène connu + complément -1- sérum (anticorps correspondants absents). Le complément n'est pas consommé car le sérum ne contient pas d'anticorps spécifiques de l'antigène connu.

Deuxième étape:

Des érythrocytes de mouton revêtus d'anticorps anti-érythrocytes de mouton de lapin sont ajoutés aux tubes. En présence de complément, les érythrocytes de mouton seront lysés (hémolyse). En l'absence de complément, les érythrocytes ne se lyseront pas (pas d'hémolyse).

A. Comme le complément est utilisé lors de la première étape de réaction, les érythrocytes de mouton revêtus d’anticorps ne sont pas lysés. Par conséquent, l'absence d'hémolyse suggère que le sérum contient des anticorps spécifiques contre l'antigène utilisé dans le test.

B. Comme le complément n'est pas utilisé dans la première étape, les érythrocytes de mouton revêtus d'anticorps sont hémolysés par le complément dans la deuxième étape. Par conséquent, la présence d'une hémolyse suggère que le sérum ne contient pas d'anticorps spécifiques contre l'antigène utilisé.

Les tests de fixation du complément sont largement utilisés dans les laboratoires cliniques et la recherche. Les virus, les anticorps sériques contre les infections virales, les anticorps contre Treponema pallidum qui causent la syphilis, les anticorps antifongiques (Coccidioidomycosis immitis, Histoplasma capsulatum), les anticorps anti-Mycoplasma pneumoniae et les anticorps anti-rickets sont détectés par le test de fixation complémentaire.