Préparation d'un monticule humide de bactéries à l'observation de sa forme et de sa taille naturelles

L'objectif est de préparer une bactérie humide à observer sa forme, sa taille et son agencement naturels dans des conditions de vie.

Objectif:

Les cellules bactériennes sont facilement et clairement visibles, lorsqu'elles sont colorées par des taches, mais dans la plupart des processus de coloration, les cellules meurent et perdent leur forme et leur taille naturelles à cause de la fixation à la chaleur et de l'exposition à des produits chimiques (taches, acide et de l'alcool).

Le but de cette expérience est d’observer la forme, la taille et la disposition naturelles des bactéries en condition de vie. La motilité ne peut pas être observée dans un montage humide, car les cellules sont pressées entre la lame et la lamelle.

Principe:

Dans un montage humide, une goutte de la suspension de bactéries est placée sur une lame, recouverte d’une lamelle et observée au microscope composé ou de préférence au microscope à champ sombre ou à contraste de phase avec un objectif à immersion dans l’huile.

Matériaux nécessaires:

Lame de verre, lamelle de couverture, vaseline, huile d'immersion (huile de laine de cèdre ou huile de paraffine), culture bactérienne (sur milieu solide ou en suspension liquide), boucle et microscope (composé, champ noir ou contraste de phase).

Procédure:

1. Une lame est correctement nettoyée sous l'eau du robinet, de sorte que l'eau ne reste pas sous forme de gouttes sur sa surface (Figure 5.2).

2. La lame est séchée en essuyant avec du papier absorbant puis en passant au-dessus d'une flamme ou en restant au soleil.

3. Si la bactérie a été cultivée sur un milieu solide (culture inclinée ou culture sur plaque), une goutte d’eau distillée est placée au centre de la lame. Une boucle est stérilisée en la chauffant sur une flamme à rouge chaud. Il est refroidi à la température ambiante. Ensuite, de manière aseptique, une petite partie de la culture bactérienne est raclée par la boucle et transférée dans la goutte d’eau.

Une suspension de bactéries est obtenue en mélangeant délicatement la boucle de bactéries dans la goutte d’eau, de telle sorte que la goutte ne se propage pas. En cas de culture dans un milieu liquide en suspension, une goutte de la suspension bactérienne est déposée de manière aseptique directement au centre de la lame, à l'aide d'une boucle stérilisée à la flamme.

4. Une gelée de pétrole ou un matériau similaire est appliqué autour de la goutte, de sorte que, lorsque la lamelle couvre-objet recouvre la goutte, l'évaporation et l'effet du courant d'air soient minimisés.

5. Une lamelle est maintenue dans une position inclinée près de la goutte de suspension de bactéries avec un bord touchant la lame.

6. Lentement, la lamelle est abaissée jusqu'à toucher la surface de la goutte.

7. Ensuite, la lamelle est libérée, de sorte que la goutte de suspension de bactéries se propage dans toutes les directions sous la lamelle. Des précautions doivent être prises pour qu’aucune bulle d’air ne se forme dans la suspension.

8. La lame est clippée sur la platine d'un microscope composé et observée à l'aide d'objectifs à faible puissance et à sec élevé. Ensuite, une goutte d'huile d'immersion est déposée sur la lamelle et observée à l'aide de l'objectif à immersion d'huile du microscope. De préférence, un microscope à contraste de phase ou à champ noir devrait être utilisé pour une observation claire.