Expérience d'identification de bactéries inconnues (avec figure)

Expérience pour l'identification de bactéries inconnues!

Principe:

L'identification de bactéries inconnues est l'une des principales responsabilités des microbiologistes. Des échantillons de sang, de tissus, d'aliments, d'eau et de produits cosmétiques sont examinés quotidiennement dans des laboratoires du monde entier afin de détecter la présence de micro-organismes contaminants.

En outre, les organisations industrielles recherchent en permanence des matériaux pour isoler les nouveaux microbes ou les microbes producteurs d’antibiotiques, ce qui augmentera le rendement en produits commercialisables tels que les vitamines, les solvants et les enzymes. Une fois isolés, ces microbes inconnus doivent être identifiés et classés.

La science de la classification s'appelle la taxonomie et traite de la séparation des organismes vivants en groupes interdépendants. Le Manuel de bactériologie déterminante de Bergey, 8ème édition, est la clé taxonomique officielle contenant les ordres, les familles, les genres et les espèces de toutes les bactéries classifiées connues (Annexe III).

Avec les connaissances fondamentales en méthodes de coloration, techniques d'isolation, nutrition bactérienne, activités biochimiques et caractéristiques de croissance des bactéries, il devient plus facile d'identifier toute bactérie inconnue.

Les caractéristiques de quelques bactéries ont été données dans le tableau 7.2. D'autres bactéries peuvent être identifiées de manière similaire sur la base des observations et des résultats obtenus en suivant les procédures expérimentales.

Matériaux nécessaires:

Glissières, glissières à cavité, boîtes de Pétri, fioles coniques, tampons de coton, boucle d'inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à écoulement laminaire, bocal, incubateur, bouillon nutritif, gélose nutritive, réactifs pour la coloration du gramme, milieux et réactifs pour tests biochimiques, microscope composé, colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Une coloration de Gram de la bactérie inconnue est effectuée. Outre la coloration de Gram, sa morphologie et son arrangement sont également enregistrés. Le test de mobilité des bactéries est déterminé par la préparation des gouttes pendantes (figure 7.25).

2. En utilisant une technique d'inoculation stérile, la bactérie est inoculée dans deux angles de gélose nutritive, un tube de bouillon nutritif et une plaque de gélose nutritive au moyen d'une inoculation sur traînée. Après l’incubation, une culture oblique est utilisée pour déterminer les caractéristiques de culture de la bactérie inconnue.

La seconde est utilisée comme sous-culture de stock, s’il est nécessaire de répéter l’un des tests. Des caractéristiques de croissance sont également observées dans le tube de bouillon et des caractéristiques de colonies sur la plaque.

3. En faisant preuve de prudence en technique stérile, afin de ne pas contaminer les cultures et d'obtenir ainsi des résultats parasites, la bactérie est inoculée dans le milieu respectif pour effectuer les différents tests biochimiques.

4. Les milieux inoculés sont incubés aux températures requises pendant les durées souhaitées.

Observations:

1. Dans la coloration de Gram, outre la réaction de Gram, la morphologie et la disposition des bactéries sont également consignées.

2. Les caractéristiques de culture des bactéries dans le bouillon nutritif, sur la gélose inclinée et sur la plaque de gélose nutritive sont notées.

3. Les résultats des réactions biochimiques sont enregistrés.

Interprétation des résultats:

1. À l'aide des données enregistrées ci-dessus (voir le tableau 7.1, par exemple) et à l'aide du Manual of Determinative Bacteriology de Bergey, la bactérie est identifiée par son genre et son espèce. Il convient de garder à l'esprit que les résultats peuvent varier en fonction des souches de chaque espèce utilisée et de la durée pendant laquelle la bactérie a été maintenue en culture.

Les résultats observés peuvent ne pas être complètement identiques aux résultats attendus. Par conséquent, les bactéries qui correspondent le mieux aux résultats sont choisies. Les caractéristiques d’identification de quelques bactéries sont indiquées dans le tableau 7.2.

2. Alternativement, en utilisant les données enregistrées ci-dessus, des numéros de code sont attribués pour les résultats enregistrés (voir tableau 7.3) et les bactéries identifiées facilement à l'aide d'un programme informatique disponible pour Apple II, IBM PC ou TRS-80.

Le programme est conçu pour identifier les bactéries inconnues sur la base du pourcentage de similitude entre les bactéries inconnues et les bactéries connues par rapport aux observations ci-dessus.

Pour lancer le programme pour Apple II ou IBM-PC:

(a) Le disque est inséré dans le lecteur de gauche.

(b) L'ordinateur est allumé.

(c) Les instructions du programme sont suivies en tapant les réponses, un numéro de bactérie inconnu et des numéros de code au fur et à mesure que les questions apparaissent à l'écran.

Pour lancer le programme pour le TRS-80:

(une) L'ordinateur est allumé.

(b) Le disque est inséré dans le lecteur inférieur.

(ré) Lorsqu'on vous le demande, “date (MM / JJ / AA)” est entré.

e) Le bouton orange est à nouveau appuyé.

(f) Les instructions du programme sont suivies en tapant les réponses, le numéro de bactérie inconnu et les numéros de code au fur et à mesure que les questions apparaissent à l'écran.

E. Méthodes automatisées d'identification de bactéries inconnues:

L'identification de bactéries inconnues par la méthode manuelle à l'aide de réactions de coloration, d'un test de motilité, de caractéristiques de culture et de tests biochimiques est un processus fastidieux, long et long. Pour rendre le processus facile et court, des méthodes automatiques ont été développées.

Ces méthodes utilisent fondamentalement les mêmes tests biochimiques que ceux utilisés dans les méthodes manuelles, mais ici, elles sont effectuées de manière automatique et l'interprétation est effectuée avec un programme assisté par ordinateur.

Les deux systèmes actuellement utilisés pour l'identification automatique des bactéries sont décrits ci-après:

1. Système API MINI

2. Système VITEK 2

F. Autre confirmation:

(1) Tests sérologiques:

Des tests sérologiques peuvent être effectués pour confirmer davantage la bactérie identifiée. Pour une suspension des bactéries identifiées (disons X), une goutte de l'antisérum (anti-X) contre cette bactérie est mélangée. Si cela entraîne la formation de grumeaux ou de précipités (complexe X-anti-X), l'identification est alors confirmée.

Les antisérums de différentes bactéries sont disponibles dans le commerce. Ils sont produits commercialement dans différents laboratoires. L'antisérum de certaines bactéries est produit en injectant des cellules tuées ou atténuées de ces bactéries (disons X) à un animal de laboratoire.

En tant que mécanisme de défense, l'animal hôte produit des anticorps (anti-X) contre cette bactérie, qui reste dans le sang. Le sang est prélevé sur cet animal et son sérum isolé par des techniques spéciales. Ce sérum, contenant des anticorps contre cette bactérie, est appelé l'antisérum de cette bactérie.

(2) test PCR:

Le test de réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une méthode moléculaire rapide de confirmation des bactéries identifiées. Cette technique est très souvent utilisée pour détecter rapidement et précisément diverses bactéries et virus.