Test à l'hydrogène fourni sur des bactéries pour déterminer leur capacité à produire de l'hydrogène (avec figure)

Lisez cet article pour en savoir plus sur le test d'hydrogène fourni sur des bactéries pour déterminer leur capacité à produire de l'hydrogène!

Principe:

Certaines bactéries ont la capacité de réduire le soufre en hydrogène sulfuré. C'est un gaz incolore qui réagit avec le fer (sels ferreux) pour produire des précipités noirs de sulfure ferreux.

Il réagit également avec l'acétate de plomb pour produire des précipités noirs de sulfure de plomb. Le test de sulfure d'hydrogène (test H, S) peut être effectué de deux manières, en fonction de la source de soufre.

Ils sont comme suit:

(je) Test H ₂ S utilisant une source de soufre inorganique

(ii) Test H ₂ S utilisant une source organique de soufre

(i) Test H2S utilisant une source inorganique de soufre:

Dans cet essai, les bactéries à tester sont cultivées sur des géloses à la gélose à base de sucre triple (gélose TSI) contenant du glucose, du saccharose, du lactose, du rouge phénol, du thiosulfate de sodium et du sulfate ferreux. Si la bactérie utilise le soufre inorganique (thiosulfate de sodium) utilisé dans le milieu, du H ₂ S est produit, qui se combine avec le sulfate ferreux du milieu pour former des précipités noirs de sulfure ferreux, ce qui entraîne un changement de couleur du crosse en noir. .

Outre l'utilisation de soufre inorganique, si les bactéries peuvent utiliser l'un des trois sucres (glucose, saccharose ou lactose), un acide est produit, ce qui réduit le pH du milieu. En conséquence, la couleur de l'inclinaison passe du rouge au jaune.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, tampons en coton, aiguille à inoculer, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal à incandescence, incubateur, gélose à trois sucres (gélose TSI) ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu gélose TSI (contenant les 3 sucres et le fer comme composants principaux) ou de sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 100 ml de milieu sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml. secouant et tourbillonnant (figure 7.13).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 4 en utilisant HCI 0, 1 N s'il est supérieur ou à l'aide de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur.

3. Le ballon est chauffé pour dissoudre complètement la gélose dans le milieu.

4. Avant de se solidifier, le milieu à l'état fondu et chaud est réparti dans 5 tubes à essai (environ 20 ml chacun).

5. Les éprouvettes sont en coton bouché, recouvertes de papier kraft et nouées avec du fil ou une bande de caoutchouc.

6. Ils sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

7. Après la stérilisation, ils sont sortis de l'autoclave et maintenus dans une position inclinée pour refroidir et solidifier le milieu, de manière à obtenir une inclinaison de la gélose TSI.

8. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans les pentes en coupant à l'aide d'un couteau dans le mégot et en laissant des stries sur la surface des pentes à l'aide d'une aiguille stérilisée à la flamme. L'aiguille est stérilisée après chaque inoculation.

9. Les pentes inoculées sont incubées à 37 ° C pendant 24 heures dans un incubateur.

Observations:

1. La couleur du bout change en noir: H ₂ S positif.

2. La couleur de la crosse ne change pas en noir: H ₂ S négatif.

(ii) Test H ₂ S avec source de soufre organique

Dans cet essai, les bactéries à tester sont cultivées dans un bouillon à la cystéine, qui contient de la cystéine en tant que source organique de soufre. Si la bactérie utilise le soufre organique (cystéine) utilisé dans le milieu à l'aide de son enzyme, la «cystéine désulfurase», de l'H ₂ S est produite. Cet H2S se combine avec l'acétate de plomb trempé dans un papier pour former des précipités noirs de sulfure de plomb, ce qui entraîne un changement de couleur de la bande de papier en noir.

Matériaux nécessaires:

Tubes à essai, fiole conique, bouchons en coton, boucle d’inoculation, autoclave, brûleur Bunsen, chambre à flux laminaire, bocal, incubateur, bouillon à la cystéine, bandes de papier filtre Whatman, solution d’acétate de plomb (saturée), colonies isolées ou cultures pures de bactéries.

Procédure:

1. Les ingrédients du milieu de bouillon à la cystéine (contenant la cystéine comme composant principal) ou de sa poudre prête à l'emploi nécessaire pour 100 ml de bouillon sont pesés et dissous dans 100 ml d'eau distillée dans une fiole conique de 250 ml par agitation et tourbillonnement ( Figure 7.14).

2. Son pH est déterminé à l'aide d'un papier pH ou d'un pH-mètre et ajusté à 7, 5 en utilisant HCI 0, 1 N s'il est supérieur ou à l'aide de NaOH 0, 1 N s'il est inférieur. Le ballon est chauffé, si nécessaire, pour dissoudre complètement les ingrédients.

3. Le bouillon est réparti dans cinq tubes à essai (environ 10 ml chacun) bouchés avec du coton, recouverts de papier kraft et noués avec du fil ou une bande de caoutchouc.

4. Les tubes de bouillon sont stérilisés à 121 ° C (pression de 15 psi) pendant 15 minutes dans un autoclave.

5. On laisse les tubes de bouillon refroidir à la température ambiante.

6. Les bactéries à tester sont inoculées de manière aseptique, de préférence dans une chambre à flux laminaire, dans le bouillon à l'aide d'une boucle d'inoculation stérilisée à la flamme Bunsen. La boucle est stérilisée après chaque inoculation.

7. Une petite bande de papier imbibée d'une solution d'acétate de plomb (saturée) est fixée à l'embouchure de chaque éprouvette de manière à ce qu'il en reste une grande partie à l'intérieur de l'éprouvette et une petite partie à l'extérieur.

8. Les tubes de bouillon inoculés sont incubés à 37 ° C pendant 48 heures dans un incubateur.