Immunofluorescence utilisée pour la détection d'antigènes dans les cellules
Immunofluorescence utilisée pour la détection d'antigènes dans les cellules!
Des composés fluorescents utilisés comme immunochimiques pour détecter les antigènes dans les tissus ont été introduits par Coons (1941).
L'immunofluorescence est utilisée pour la détection d'antigènes dans des cellules ou des tissus (en utilisant des anticorps connus) ainsi que pour la détection d'anticorps dans le sérum (en utilisant des antigènes connus). La fluorescence est l'émission de lumière d'une couleur lorsque la substance est exposée à une lumière d'une autre couleur. Lorsqu'une substance fluorescente est excitée avec une lumière d'une longueur d'onde particulière, elle absorbe la lumière et émet une lumière d'une autre longueur d'onde.
je. L'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) a un maximum d'absorbance de la lumière entre 490 et 495 nm et émet de la lumière à 530 nm (couleur verte).
ii. L'isothiocyanate de tétraméthyle de rhodamine a une absorbance maximale de lumière à 550 nm et émet une lumière de couleur rouge (580 nm).
une. Immunofluorescence directe:
Cette technique est utilisée pour détecter des antigènes dans des cellules ou des tissus.
Le tissu, dont l'antigène est inconnu, est fixé sur une lame de verre.
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Un antisérum connu (spécifique de l'antigène d'intérêt) conjugué à FIT (connu sous le nom de conjugué) est déposé sur le tissu et incubé.
je. Si l'antigène d'intérêt est dans les tissus, le conjugué se lie à l'antigène.
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Ensuite, la lame est lavée pour éliminer le conjugué non lié.
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La lame est ensuite visualisée au microscope à fluorescence.
je. On verra une couleur verte brillante s’il ya un antigène dans le tissu.
ii. S'il n'y a pas d'antigène dans le tissu, tout le conjugué aurait été lavé pendant l'étape de lavage et, par conséquent, il n'y aurait pas de couleur verte.
Cette technique est également utilisée pour détecter la présence d'antigènes bactériens ou viraux dans les tissus infectés.
b. Immunofluorescence indirecte:
Cette technique est utilisée pour détecter les anticorps dans le sérum.
Les cellules contenant des antigènes connus sont fixées sur une lame de verre.
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Le sérum à tester est ajouté sur la lame et incubé.
je. S'il y a des anticorps (contre les antigènes dans les cellules) dans le sérum, les anticorps se lieront aux antigènes dans les cellules.
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Ensuite, la lame est lavée pour éliminer les composants sériques non liés.
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Des immunoglobulines anti-humaines conjuguées au FITC sont ajoutées et incubées.
je. L'immunoglobuline anti-humaine conjuguée au FITC se liera aux anticorps sériques liés aux antigènes cellulaires.
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Après le lavage, la lame est vue au microscope à fluorescence.
je. La présence d'une couleur verte brillante indique que le sérum contient des anticorps anti-antigènes dans les cellules.
ii. L'absence de couleur verte indique l'absence d'anticorps sériques anti-antigènes dans les cellules utilisées.
